| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 中英文缩略词表 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-19页 |
| 第1章 miRNA1013p在视网膜母细胞瘤中的表达情况及其对细胞增殖的影响 | 第19-43页 |
| 1 前言 | 第19-20页 |
| 2 材料 | 第20-26页 |
| 2.1 标本的收集 | 第20页 |
| 2.2 试剂 | 第20-26页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.2 自配试剂 | 第21-25页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 3 实验方法 | 第26-35页 |
| 3.1 miRNA的提取 | 第26-29页 |
| 3.1.1 天根生物有限公司的miRNA提取分离试剂盒 | 第26-27页 |
| 3.1.2 合成miRNA的cDNA | 第27-29页 |
| 3.2 细胞培养 | 第29-30页 |
| 3.2.1 细胞传代 | 第29页 |
| 3.2.2 细胞冻存 | 第29-30页 |
| 3.2.3 细胞复苏 | 第30页 |
| 3.3 Lipofectamine3000法转染视网膜母细胞瘤细胞 | 第30-31页 |
| 3.4 MTT法检测细胞活力 | 第31页 |
| 3.5 流式细胞术分析细胞周期 | 第31-32页 |
| 3.3.1 主要试剂 | 第31页 |
| 3.3.2 操作步骤 | 第31-32页 |
| 3.3.3 注意事项 | 第32页 |
| 3.6 稳定细胞株的构建 | 第32-34页 |
| 3.7 裸鼠成瘤实验 | 第34-35页 |
| 3.8 统计学分析 | 第35页 |
| 4 结果 | 第35-40页 |
| 4.1 mi RNA1013p在视网膜母细胞瘤组织及正常组织中的表达情况 | 第35-36页 |
| 4.2 mi RNA1013p在视网膜母细胞瘤细胞株中的表达 | 第36页 |
| 4.3 mi RNA1013p mimics转染至视网膜母细胞瘤细胞的表达情况 | 第36-37页 |
| 4.4 MTT检测miRNA-101-3p mimics对视网膜母细胞瘤细胞活力的作用 | 第37-38页 |
| 4.5 mi RNA1013p mimics对视网膜母细胞瘤细胞周期的作用 | 第38-39页 |
| 4.6 体内实验观察miRNA1013p mimics对视网膜母细胞瘤增殖的作用 | 第39-40页 |
| 5 结论 | 第40-41页 |
| 6 讨论 | 第41-43页 |
| 第2部分 EZH2和HDAC是mi RNA1013p的靶基因 | 第43-60页 |
| 1 前言 | 第43页 |
| 2 材料 | 第43-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 2.2 试剂 | 第44页 |
| 2.3 自配试剂 | 第44-46页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第46-47页 |
| 3. 实验方法 | 第47-53页 |
| 3.1 细胞转代 | 第47页 |
| 3.2 细胞冻存 | 第47-48页 |
| 3.3 细胞复苏 | 第48页 |
| 3.4 报告基因实验 | 第48-50页 |
| 3.5 提取RNA的及实时荧光定量 | 第50-51页 |
| 3.6 蛋白免疫印迹反应（Western blot） | 第51-53页 |
| 4 结果 | 第53-58页 |
| 4.1 通过生物信息学分析发现EZH2和HDAC9是miRNA1013p潜在的靶基因 | 第53-54页 |
| 4.2 荧光素酶报告基因表达实验证实EZH2是miRNA1013p的靶基因 | 第54-55页 |
| 4.3 荧光素酶报告基因表达实验证实HDAC9是miRNA1013p的靶基因 | 第55-56页 |
| 4.4 Western blot结果发现在视网膜母细胞瘤细胞中过表达miRNA1013p抑制EZH2和HDAC9蛋白表达 | 第56-57页 |
| 4.5 qRT-PCR结果发现在视网膜母细胞瘤细胞中过表达miRNA1013p抑制EZH2和HDAC9mRNA表达 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58页 |
| 6 讨论 | 第58-60页 |
| 第三部分 miRNA1013p通过调EZH2和HDAC的表达影响视网膜母细胞瘤细胞的生物学特征 | 第60-85页 |
| 1 前言 | 第60-61页 |
| 2 材料 | 第61-65页 |
| 2.1 标本的收集 | 第61页 |
| 2.2 实验材料 | 第61页 |
| 2.3 试剂 | 第61-62页 |
| 2.4 自配试剂 | 第62-64页 |
| 2.5 主要仪器设备 | 第64-65页 |
| 3 实验方法 | 第65-76页 |
| 3.1 s EZH2和shHDAC9质粒的构建 | 第65-71页 |
| 3.1.1 向pSIREN-RetroQ-TetH载体中注入RNA干扰基因 | 第65-66页 |
| 3.1.2 制备感受态细胞 | 第66-67页 |
| 3.1.3 转化 | 第67页 |
| 3.1.4 质粒小提 | 第67-68页 |
| 3.1.5 质粒酶切鉴定 | 第68页 |
| 3.1.6 用测序来鉴定重组质粒 | 第68-71页 |
| 3.2 无内毒素质粒大提 | 第71-72页 |
| 3.3 细胞培养 | 第72页 |
| 3.4 RNA的提取及实时荧光定量PCR | 第72-74页 |
| 3.4.1 组织中RNA提取 | 第72-73页 |
| 3.4.2 RNA逆转录成cDNA | 第73-74页 |
| 3.4.3 实时荧光定量PCR扩增 | 第74页 |
| 3.5 MTT法检测细胞活力 | 第74-75页 |
| 3.6 Lipofectamine3000法转染视网膜母细胞瘤细胞 | 第75页 |
| 3.7 统计学分析 | 第75-76页 |
| 4 结果 | 第76-81页 |
| 4.1 EZH2在视网膜母细胞瘤组织及正常组织中的表达情况 | 第76页 |
| 4.2 沉默EZH2对视网膜母细胞瘤细胞增殖能力的影响 | 第76-77页 |
| 4.3 mi RNA1013p通过调控EZH2的表达调控视网膜母细胞瘤的增殖能力 | 第77-78页 |
| 4.4 HDAC9在视网膜母细胞瘤组织及正常组织中的表达情况 | 第78-79页 |
| 4.5 沉默HDAC9对视网膜母细胞瘤细胞增殖能力的影响 | 第79-80页 |
| 4.6 mi RNA1013p通过调控HDAC9的表达调控视网膜母细胞瘤的增殖能力 | 第80-81页 |
| 5 结论 | 第81页 |
| 6 讨论 | 第81-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-90页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第90-91页 |
| 综述 | 第91-96页 |
| 参考文献 | 第94-96页 |
