| 中文摘要 | 第4-8页 |
| 英文摘要 | 第8-11页 |
| 缩略词表 | 第12-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-28页 |
| 1.1 牙鲆变态的分子机制 | 第16-19页 |
| 1.2 甲状腺激素在牙鲆变态发育过程中的作用 | 第19-24页 |
| 1.3 Drosha基因在个体发育中的作用 | 第24-28页 |
| 第二章 甲状腺激素对牙鲆Drosha基因表达的影响 | 第28-53页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第28-32页 |
| 2.1.1 样品采集 | 第28-29页 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 | 第29-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-44页 |
| 2.2.1 牙鲆组织总RNA提取与鉴定 | 第32页 |
| 2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第32-34页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第34页 |
| 2.2.4 牙鲆Drosha基因片段克隆 | 第34-37页 |
| 2.2.5 牙鲆Drosha基因全长克隆 | 第37-43页 |
| 2.2.6 Drosha基因cDNA小片段、5'RACE和 3'RACE序列拼接 | 第43页 |
| 2.2.7 生物信息学分析 | 第43页 |
| 2.2.8 实时荧光定量分析 | 第43-44页 |
| 2.3 结果 | 第44-50页 |
| 2.3.1 牙鲆Drosha cDNA克隆及分析 | 第44-47页 |
| 2.3.2 .Drosha基因在牙鲆发育过程中的表达分析 | 第47-50页 |
| 2.4 讨论 | 第50-53页 |
| 2.4.1 Drosha基因在各组织中的表达 | 第51页 |
| 2.4.2.Drosha基因仔鱼各发育时期的表达 | 第51-52页 |
| 2.4.3 外源甲状腺激素对Drosha基因表达的影响 | 第52-53页 |
| 第三章 甲状腺激素受体与DROSHA蛋白的相互作用 | 第53-60页 |
| 3.1 材料与方法 | 第53-56页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第53页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第53-56页 |
| 3.2 结果 | 第56-57页 |
| 3.3 讨论 | 第57-60页 |
| 3.3.1 利用免疫共沉淀技术研究THR-Drosha之间的相互作用 | 第57-58页 |
| 3.3.2 实验的质量控制 | 第58页 |
| 3.3.3 THR和Drosha相互作用调控miRNA的生成 | 第58-60页 |
| 第四章RNA干扰沉默Drosha基因表达 | 第60-73页 |
| 4.1 材料 | 第60-61页 |
| 4.2 实验方法 | 第61-65页 |
| 4.2.1 Drosha-siRNA靶点的选择、设计及合成 | 第61页 |
| 4.2.2 细胞转染 | 第61-62页 |
| 4.2.3 转染效率的检测 | 第62页 |
| 4.2.4 Realtime-PCR检测Drosha mRNA表达 | 第62-63页 |
| 4.2.5 Western blot检测Drosha蛋白表达 | 第63页 |
| 4.2.6 siRNA最佳作用浓度的筛选 | 第63页 |
| 4.2.7 siRNA最佳作用时间的筛选 | 第63-64页 |
| 4.2.8 细胞凋亡检测 | 第64页 |
| 4.2.9 Realtime-PCR检测Drosha下游基因CDKN2A,Cdc42 的表达 | 第64页 |
| 4.2.10 统计学处理 | 第64-65页 |
| 4.3 结果 | 第65-70页 |
| 4.3.1 siRNA转染效果检测 | 第65页 |
| 4.3.2 siRNA沉默效果检测 | 第65-66页 |
| 4.3.3 siRNA最佳浓度的筛选 | 第66-67页 |
| 4.3.4 siRNA最佳作用时间的筛选 | 第67-68页 |
| 4.3.5 siRNA转染后细胞凋亡的检测 | 第68-69页 |
| 4.3.6 Realtime-PCR检测Drosha基因沉默后pri-miRNA和miRNA的表达 | 第69页 |
| 4.3.7 Realtime-PCR检 测Drosha基 因沉默后细胞周期调控基因CDKN2A,Cdc42 mRNA表达 | 第69-70页 |
| 4.4 讨论 | 第70-73页 |
| 4.4.1 利用siRNA干扰技术靶向抑制Drosha基因的表达 | 第70-71页 |
| 4.4.2 牙鲆胚胎细胞中Drosha基因靶向沉默对下游基因的影响 | 第71-72页 |
| 4.4.3 靶向沉默Drosha基因后导致miRNA表达谱的变化 | 第72-73页 |
| 第五章microRNA靶基因预测及验证 | 第73-105页 |
| 5.1 材料与方法 | 第74-80页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第74页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第74-80页 |
| 5.2 结果 | 第80-98页 |
| 5.2.1 肌肉相关microRNA靶基因预测及验证 | 第80-91页 |
| 5.2.2 细胞周期相关靶基因预测及验证 | 第91-98页 |
| 5.3 讨论 | 第98-105页 |
| 5.3.1 α-TM在牙鲆组织和发育时期的表达 | 第98-99页 |
| 5.3.2 牙鲆HDAC4 序列的结构特点 | 第99-100页 |
| 5.3.3 牙鲆HDAC4 在牙鲆发育过程中的作用 | 第100-102页 |
| 5.3.4 牙鲆HDAC4 是miR-1 和miR-133a的靶基因 | 第102-103页 |
| 5.3.5 牙鲆Cdc42 的结构特点及在牙鲆发育过程中的作用 | 第103-104页 |
| 5.3.6 Cdc42 是miR-17 的靶基因 | 第104-105页 |
| 第六章 总结与展望 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-116页 |
| 发表论文 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
