| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 基本概念方法简介 | 第10-17页 |
| 1 生物防治植物病害概述 | 第10-13页 |
| 1.1 萎缩芽孢杆菌 | 第10页 |
| 1.2 胡麻枯萎病 | 第10-11页 |
| 1.3 生物防治 | 第11页 |
| 1.4 β-1,3-葡聚糖酶 | 第11-12页 |
| 1.4.1 β-1,3-葡聚糖酶简介 | 第11-12页 |
| 1.4.2 β-1,3-葡聚糖酶在生物防治中的作用 | 第12页 |
| 1.5 几丁质酶 | 第12页 |
| 1.5.1 几丁质酶简介 | 第12页 |
| 1.5.2 几丁质酶在生物防治中的作用 | 第12页 |
| 1.6 丝氨酸蛋白酶 | 第12-13页 |
| 1.6.1 丝氨酸蛋白酶简介 | 第12-13页 |
| 1.6.2 丝氨酸蛋白酶在生物防治中的作用 | 第13页 |
| 2 酶活性与蛋白总量测定 | 第13-15页 |
| 2.1 蛋白酶活性测定方法 | 第13-14页 |
| 2.2 β-1,3-葡聚糖酶活性测定方法 | 第14页 |
| 2.3 几丁质酶活性测定方法 | 第14页 |
| 2.4 蛋白总量测定方法 | 第14-15页 |
| 3 显微镜简介 | 第15页 |
| 3.1 激光共聚焦扫描显微镜 | 第15页 |
| 3.2 扫描电子显微镜 | 第15页 |
| 4 本论文的研究意义及研究内容 | 第15-17页 |
| 4.1 研究意义 | 第15-16页 |
| 4.2 研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 萎缩芽孢杆菌SF1拮抗蛋白生防功能分析 | 第17-58页 |
| 1 材料与方法 | 第17-31页 |
| 1.1 菌种和载体 | 第17页 |
| 1.2 培养基 | 第17-18页 |
| 1.3 主要试剂 | 第18页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 1.5 主要溶液 | 第19-21页 |
| 1.6 实验方法与步骤 | 第21-31页 |
| 1.6.1 细菌的培养 | 第21页 |
| 1.6.2 细菌基因组提取 | 第21-22页 |
| 1.6.3 感受态细胞制备 | 第22页 |
| 1.6.4 基因的PCR扩增 | 第22-24页 |
| 1.6.5 克隆载体的构建、转化及筛选 | 第24-25页 |
| 1.6.6 表达载体的构建、转化及筛选 | 第25-26页 |
| 1.6.7 重组菌株的诱导表达及表达条件优化 | 第26-27页 |
| 1.6.8 蛋白纯化 | 第27页 |
| 1.6.9 western blot检测 | 第27-28页 |
| 1.6.10 蛋白含量测定 | 第28页 |
| 1.6.11 丝氨酸蛋白酶活力测定 | 第28-29页 |
| 1.6.12 几丁质酶活力测定 | 第29页 |
| 1.6.13 β-1,3葡聚糖酶活力测定 | 第29页 |
| 1.6.14 体外抑菌率测定 | 第29-30页 |
| 1.6.15 SEM尖孢镰刀菌样品制备 | 第30页 |
| 1.6.16 LSCM样品制备 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-58页 |
| 2.1 大肠杆菌重组菌株的构建 | 第31-34页 |
| 2.1.1 菌株SF1全基因组提取 | 第31页 |
| 2.1.2 基因克隆 | 第31-32页 |
| 2.1.3 克隆载体的构建及筛选鉴定 | 第32-33页 |
| 2.1.4 表达载体的构建及筛选鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2 重组菌株的诱导表达及表达条件优化 | 第34-38页 |
| 2.2.1 重组菌株诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.2.2 western blot检测 | 第35-36页 |
| 2.2.3 诱导时间优化 | 第36页 |
| 2.2.4 接种量优化 | 第36-37页 |
| 2.2.5 诱导温度优化 | 第37-38页 |
| 2.3 重组菌株目的蛋白活性测定 | 第38-41页 |
| 2.3.1 重组菌株A2-6丝氨酸蛋白酶活力测定 | 第38-39页 |
| 2.3.1.1 标准曲线的绘制 | 第38-39页 |
| 2.3.1.2 丝氨酸蛋白酶活性测定 | 第39页 |
| 2.3.2 重组菌株C1-4几丁质酶酶活 | 第39-40页 |
| 2.3.2.1 标准曲线的绘制 | 第39-40页 |
| 2.3.2.2 几丁质酶活性测定 | 第40页 |
| 2.3.3 重组菌株B2-4β-1,3葡聚糖酶活 | 第40-41页 |
| 2.3.3.1 标准曲线的绘制 | 第40-41页 |
| 2.3.3.2 β-1,3葡聚糖酶活性测定 | 第41页 |
| 2.4 重组表达蛋白的纯化 | 第41-43页 |
| 2.4.1 蛋白质含量测定标准曲线 | 第41-42页 |
| 2.4.2 目的蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| 2.4.3 纯化蛋白纯度分析 | 第43页 |
| 2.5 重组表达蛋白抑菌功能的分析 | 第43-55页 |
| 2.5.1 单一蛋白对病原真菌的拮抗作用 | 第43-47页 |
| 2.5.1.1 体外抑菌率的测定 | 第43-45页 |
| 2.5.1.2 不同显微镜观察菌丝形态 | 第45-47页 |
| 2.5.2 两种蛋白组合对病原真菌的拮抗作用 | 第47-52页 |
| 2.5.2.1 体外抑菌率 | 第48-49页 |
| 2.5.2.2 不同显微镜观察菌丝形态 | 第49-52页 |
| 2.5.3 三种蛋白对病原真菌的拮抗作用 | 第52-55页 |
| 2.5.3.1 体外抑菌率 | 第52-54页 |
| 2.5.3.2 不同显微镜观察菌丝形态 | 第54-55页 |
| 2.6 讨论 | 第55-56页 |
| 2.7 结论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 附录 | 第62-67页 |