| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 蛋白质量控制系统 | 第10-16页 |
| 1.1.1 蛋白质降解的类型 | 第10-11页 |
| 1.1.2 蛋白酶Clp的结构与功能 | 第11-12页 |
| 1.1.3 肽酶ClpP | 第12-13页 |
| 1.1.4 解折叠酶的组件(ClpX/ClpA/ClpC) | 第13-15页 |
| 1.1.5 解折叠酶-氨基肽酶复合体 | 第15-16页 |
| 1.2 蛋白质量控制系统在细菌中的功能 | 第16页 |
| 1.3 研究意义 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-25页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 实验质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.3 实验所用引物 | 第19-21页 |
| 2.1.4 培养基 | 第21-23页 |
| 2.1.5 实验试剂 | 第23-25页 |
| 2.2 实验过程中涉及的实验方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 快速提取蜡样芽孢杆菌基因组DNA方法 | 第25页 |
| 2.2.2 DNA快速纯化回收方法 | 第25页 |
| 2.2.3 GM 2163电击感受态制备方法 | 第25-26页 |
| 2.2.4 芽孢杆菌0-9电击感受态制备方法 | 第26页 |
| 2.2.5 质粒小量提取方法 | 第26-27页 |
| 2.2.6 敲除载体pMAD-XX的构建 | 第27-28页 |
| 2.3 实验过程 | 第28-38页 |
| 2.3.1 基因敲除 | 第28-31页 |
| 2.3.2 基因缺陷型菌株和0-9野生型菌株表型测定 | 第31-34页 |
| 2.3.3 clpX与ftsH基因回补 | 第34-35页 |
| 2.3.4 回补型菌株表型测定 | 第35页 |
| 2.3.5 clpX基因表达量的测定 | 第35-37页 |
| 2.3.6 clpX基因鉴定 | 第37页 |
| 2.3.7 clpP1,clpP2双敲除及表型测定 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-54页 |
| 3.1 获得ClpX/Hsp100蛋白家族基因敲除菌株 | 第38-39页 |
| 3.1.1 ClpX/Hsp100蛋白家族基因敲除载体构建 | 第38-39页 |
| 3.1.2 获得Clpx/Hsp100蛋白家族基因缺失菌株 | 第39页 |
| 3.2 基因缺陷型菌株与野生型菌株表型测定 | 第39-47页 |
| 3.2.1 细菌生长曲线测定 | 第39-40页 |
| 3.2.2 菌体形态观察 | 第40页 |
| 3.2.3 产芽孢能力测定 | 第40-41页 |
| 3.2.4 运动能力测定 | 第41-42页 |
| 3.2.5 生物薄膜实验 | 第42-43页 |
| 3.2.6 合成培养基Msgg点板测定 | 第43-44页 |
| 3.2.7 产蛋白酶测定 | 第44-45页 |
| 3.2.8 高NaCl耐受性测定 | 第45页 |
| 3.2.9 维生素K耐受性测定 | 第45-46页 |
| 3.2.10 高温耐受性测定 | 第46页 |
| 3.2.11 菌液与真菌的平板对峙。 | 第46-47页 |
| 3.2.12 菌体发酵液与真菌的对峙实验 | 第47页 |
| 3.3 clpX与ftsH基因回补菌株 | 第47-48页 |
| 3.3.1 clpX与ftsH基因回补载体构建 | 第47-48页 |
| 3.3.2 ftsh基因回补菌株验证 | 第48页 |
| 3.4 互补菌株的表型测定 | 第48-50页 |
| 3.4.1 芽孢观察 | 第48-49页 |
| 3.4.2 运动能力测定 | 第49页 |
| 3.4.3 产生物薄膜测定 | 第49-50页 |
| 3.4.4 菌体的观察 | 第50页 |
| 3.4.5 菌落形态的观察 | 第50页 |
| 3.5 clpX基因表达量的测定 | 第50-51页 |
| 3.6 clpX基因的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.7 0-9(△clpP1 clpP2)菌株的表型测定 | 第52-54页 |
| 3.7.1 运动性实验 | 第52-53页 |
| 3.7.2 生物膜实验 | 第53页 |
| 3.7.3 产芽孢实验 | 第53-54页 |
| 4 结论 | 第54-58页 |
| 5 讨论 | 第58-60页 |
| 6 展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
