摘要 | 第4-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
1 绪论 | 第10-23页 |
1.1 细胞骨架蛋白 | 第10-16页 |
1.1.1 细胞骨架蛋白的概述 | 第10页 |
1.1.2 细胞骨架蛋白与相关病理 | 第10-12页 |
1.1.3 与肾脏自身免疫疾病相关的蛋白的总结 | 第12-16页 |
1.2 原肌球蛋白 | 第16-21页 |
1.2.1 原肌球蛋白概述 | 第16-21页 |
1.3 二维凝胶电泳技术概述 | 第21页 |
1.4 PDQuest图像分析技术 | 第21页 |
1.5 研究目的及意义 | 第21-23页 |
2 建立双肾缺血再灌注致大鼠慢性肾病模型 | 第23-28页 |
2.1 试剂与仪器 | 第23-24页 |
2.2 实验方法 | 第24-25页 |
2.2.1 动物分组及缺血再灌注(ischemia-reprfusion)方法 | 第24页 |
2.2.2 蛋白尿指标检测 | 第24页 |
2.2.3 肾脏组织学病理检查 | 第24页 |
2.2.4 肾脏IgG抗体沉积检测 | 第24页 |
2.2.5 统计学分析 | 第24-25页 |
2.3 结果与分析 | 第25-28页 |
2.3.1 肾功能检测结果 | 第25页 |
2.3.2 肾脏组织病理检查结果 | 第25-26页 |
2.3.3 肾脏IgG抗体沉积检测结果 | 第26-28页 |
3 大鼠肾脏总蛋白与慢性肾病大鼠血清存在抗原抗体反应 | 第28-35页 |
3.1 实验原理 | 第28页 |
3.2 材料与方法 | 第28-31页 |
3.2.1 提取正常大鼠肾脏总蛋白 | 第29-30页 |
3.2.2 肾脏总蛋白包埋大鼠血清反应的Elisa实验 | 第30页 |
3.2.3 肾脏总蛋白跑胶后与大鼠血清反应的westernblot实验 | 第30-31页 |
3.2.4 统计学分析 | 第31页 |
3.3 结果与分析 | 第31-35页 |
3.3.1 肾脏总蛋白包埋后与大鼠血清反应的Elisa实验结果 | 第31-32页 |
3.3.2 肾脏总蛋白一维凝胶跑胶后与大鼠血清做westernblot的实验结果 | 第32-35页 |
4 疾病肾脏中抗原抗体复合物的共沉淀反应及目标条带的确定 | 第35-41页 |
4.1 免疫共沉淀Co-Immunoprecipitation实验 | 第35-41页 |
4.1.1 实验原理 | 第35页 |
4.1.2 材料与方法 | 第35-37页 |
4.1.3 Input实验验证样品中是否含有IgG | 第37页 |
4.1.4 COIP实验 | 第37-38页 |
4.1.5 结果与分析 | 第38-41页 |
5 质谱筛选靶蛋白 | 第41-44页 |
5.1 实验原理 | 第41页 |
5.2 实验器材及试剂 | 第41-42页 |
5.3 实验步骤 | 第42页 |
5.4 结果与分析 | 第42-44页 |
6 基于一维及二维凝胶电泳以已知抗体鉴定靶蛋白TMP3 | 第44-54页 |
6.1 一维凝胶电泳验证TMP3 | 第44-46页 |
6.1.1 实验原理 | 第44页 |
6.1.2 实验仪器与试剂 | 第44页 |
6.1.3 实验步骤 | 第44-45页 |
6.1.4 结果与分析 | 第45-46页 |
6.2 基于二维凝胶电泳以已知抗体鉴定靶蛋白TMP3 | 第46-48页 |
6.2.1 实验原理 | 第46页 |
6.2.2 实验器材及试剂 | 第46-47页 |
6.2.3 实验步骤 | 第47-48页 |
6.3 用大鼠肾脏总蛋白跑二维凝胶后的westenblot实验 | 第48-54页 |
6.3.1 实验分组 | 第48页 |
6.3.2 以大鼠血清或已知抗体为一抗分别与大鼠肾脏总蛋白做二维凝胶的westenblot实验 | 第48页 |
6.3.3 PDQuest软件直接分析2-DE图片上疾病组与对照组蛋白点表达差异 | 第48-49页 |
6.3.4 结果与分析 | 第49-54页 |
7 Elisa实验验证慢性肾病大鼠血清中抗TMP3抗体水平 | 第54-58页 |
7.1 实验原理 | 第54页 |
7.2 实验器材及试剂 | 第54页 |
7.3 实验步骤 | 第54-55页 |
7.3.1 TMP3抗体包埋用肾脏总蛋白孵育后血清反应 | 第54-55页 |
7.3.2 Vimentin抗体包埋用肾脏总蛋白孵育后血清反应 | 第55页 |
7.3.3 统计学分析 | 第55页 |
7.4 结果与分析 | 第55-58页 |
8 结论 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-66页 |
致谢 | 第66-67页 |
附录 | 第67-68页 |
攻读学位期间的研究成果 | 第68页 |