| Abstract | 第6页 |
| Chapter 1: Introduction | 第9-21页 |
| 1.1 Characteristics of Acetylcholinesterase | 第9-13页 |
| 1.1.1 Function of AChE | 第9-10页 |
| 1.1.2 Reaction Pathway of AChE | 第10-11页 |
| 1.1.3 Structure of AChE | 第11-12页 |
| 1.1.4 Inhibitors of AChE | 第12-13页 |
| 1.2 Recombinant DNA | 第13-17页 |
| 1.2.1 Restriction Endonucleases | 第13-15页 |
| 1.2.2 Bacterial Plasmids | 第15-17页 |
| 1.3 Maltose-Binding Proteins | 第17-18页 |
| 1.3.1 Constituents of MBP | 第17-18页 |
| 1.3.2 Important tool in Protein Purification | 第18页 |
| 1.3.3 Useful Aid in Proper Protein Folding | 第18页 |
| 1.4 Ellman Method | 第18-21页 |
| 1.4.1 Importance of Ellman Method | 第18-19页 |
| 1.4.2 Modiifed Ellman Method | 第19-21页 |
| Chapter 2: Materials and Methods | 第21-26页 |
| 2.1 Gene Amplification | 第21页 |
| 2.1.1 RT-PCR Procedure | 第21页 |
| 2.1.2 Pre-Denature | 第21页 |
| 2.2 Subcloning into Vectors | 第21-22页 |
| 2.2.1 Ligation with pMD18-T Vector | 第21-22页 |
| 2.2.2 Ligation with pMEKml2 Vector | 第22页 |
| 2.3 Protein Expression | 第22-24页 |
| 2.3.1 Overview of Procedure | 第22-23页 |
| 2.3.2 Induce AChE for expression and detection with SDS-PAGE | 第23-24页 |
| 2.3.3 Ultrasonication of Samples | 第24页 |
| 2.4 Maltose-binding Protein-tag Purification | 第24-25页 |
| 2.4.1 Construction of MBP —Puriifcation Apparatus | 第24页 |
| 2.4.2 Sample Concentration atfer Buffer Wash | 第24-25页 |
| 2.5 Measurement of AChE Enzymatic Activity | 第25-26页 |
| Chapter 3: Results and Discussion | 第26-33页 |
| 3.1 Construction of pMEK-ace | 第26页 |
| 3.2 Expression and Purification of pMEK-ace | 第26-30页 |
| 3.2.1 Expression at 20°C for 8 and 12 hours | 第26-27页 |
| 3.2.2 Comparison of Expression at 20°C or 28°C | 第27-28页 |
| 3.2.3 Protein Purification atfer Maltose-buffer Wash | 第28-30页 |
| 3.3 Characterization of Recombinant AChE | 第30-31页 |
| 3.3.1Optimum Temperature Range | 第30页 |
| 3.3.2Optimum pH Range | 第30-31页 |
| 3.3.3 Optimum Substrate Concentration Range | 第31页 |
| 3.4 Discussion and Conclusion | 第31-33页 |
| References | 第33-37页 |
| Publications | 第37-38页 |
| Acknowledgements | 第38页 |
