| 摘要 | 第10-11页 |
| ABSTRACT | 第11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1. 模式植物拟南芥的特性 | 第12-14页 |
| 1.1 模式生物 | 第12页 |
| 1.2 模式植物 | 第12-13页 |
| 1.3 拟南芥的特性 | 第13-14页 |
| 2. 植物模拟病斑突变体的研究进展 | 第14-17页 |
| 2.1 模拟病斑的基本定义 | 第14页 |
| 2.2 模拟病斑形成的机理 | 第14-17页 |
| 2.2.1 抗病信号途径的改变导致病斑的产生 | 第15-16页 |
| 2.2.2 植物细胞程序性死亡途径的失控导致病斑的产生 | 第16页 |
| 2.2.3 正常代谢途径的紊乱导致病斑的产生 | 第16页 |
| 2.2.4 活性氧或自由基在模拟病斑形成中发挥很重要的作用 | 第16-17页 |
| 2.2.5 光照,湿度等环境因素影响病斑的形成 | 第17页 |
| 3. 植物新基因的克隆技术 | 第17-25页 |
| 3.1 基于同源序列的候选基因法 | 第17-18页 |
| 3.2 转座子标签技术 | 第18页 |
| 3.3 差异表达基因分离技术 | 第18-20页 |
| 3.4 图位克隆技术 | 第20-25页 |
| 3.4.1 基本原理 | 第20-21页 |
| 3.4.2 核心技术环节 | 第21-25页 |
| 3.4.3 图位克隆技术的应用 | 第25页 |
| 4. 本论文研究的目的与意义以及课题的来源 | 第25-26页 |
| 第二章 拟南芥SDL基因的分离 | 第26-48页 |
| 1. 实验材料与试剂 | 第26-29页 |
| 1.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 1.1.1 拟南芥植株 | 第26页 |
| 1.1.2 菌株 | 第26页 |
| 1.1.3 BAC质粒 | 第26页 |
| 1.1.4 载体质粒 | 第26-28页 |
| 1.2 实验试剂 | 第28-29页 |
| 1.2.1 普通试剂 | 第28页 |
| 1.2.2 酶 | 第28页 |
| 1.2.3 试剂盒 | 第28页 |
| 1.2.4 抗生素 | 第28-29页 |
| 2. 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.1 候选片段的分析 | 第29页 |
| 2.2 植物转化载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.2.1 BAC质粒和载体的酶切 | 第29-30页 |
| 2.2.2 酶切片段的预测 | 第30-31页 |
| 2.2.3 片段和载体的回收纯化 | 第31页 |
| 2.2.4 片段和载体的连接 | 第31-32页 |
| 2.3 大肠杆菌的转化与鉴定 | 第32-34页 |
| 2.3.1 大肠杆菌(热激法)感受态的制备 | 第32-33页 |
| 2.3.2 热激法转化大肠杆菌 | 第33页 |
| 2.3.3 质粒的扩增 | 第33页 |
| 2.3.4 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.3.5 转化子的酶切鉴定 | 第34页 |
| 2.4 农杆菌的转化与鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4.1 农杆菌(冻溶法)感受态的制备 | 第34页 |
| 2.4.2 冻溶法转化农杆菌 | 第34-35页 |
| 2.4.3 农杆菌质粒的提取 | 第35页 |
| 2.4.4 农杆菌质粒的酶切鉴定 | 第35页 |
| 2.5 拟南芥的浸染转化及鉴定 | 第35-36页 |
| 2.5.1 拟南芥的培养 | 第35-36页 |
| 2.5.2 农杆菌的培养 | 第36页 |
| 2.5.3 转化菌液的配置 | 第36页 |
| 2.5.4 花序浸泡法转化拟南芥 | 第36页 |
| 2.5.5 转基因植株的抗性筛选 | 第36页 |
| 2.6 表型互补实验 | 第36-37页 |
| 2.7 可能候选片段的测序分析 | 第37页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第37-47页 |
| 3.1 候选片段的分析 | 第37-39页 |
| 3.2 植物转化载体的构建 | 第39-44页 |
| 3.3 拟南芥的转化 | 第44-45页 |
| 3.4 表型互补实验 | 第45-46页 |
| 3.5 测序 | 第46-47页 |
| 4. 讨论与小结 | 第47-48页 |
| 4.1 讨论 | 第47页 |
| 4.2 小结 | 第47-48页 |
| 第三章 SDL基因的功能互补验证 | 第48-58页 |
| 1. 实验材料和试剂 | 第48-49页 |
| 1.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 1.1.1 拟南芥植株 | 第48页 |
| 1.1.2 菌株 | 第48页 |
| 1.1.3 载体质粒 | 第48-49页 |
| 1.2 实验试剂 | 第49页 |
| 1.2.1 普通试剂 | 第49页 |
| 1.2.2 酶 | 第49页 |
| 1.2.3 试剂盒 | 第49页 |
| 1.2.4 抗生素 | 第49页 |
| 2. 实验方法 | 第49-52页 |
| 2.1 DNA的提取 | 第49-50页 |
| 2.2 目的片段的获得 | 第50-51页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第50页 |
| 2.2.2 PCR反应体系和反应程序 | 第50页 |
| 2.2.3 PCR产物纯化 | 第50-51页 |
| 2.3 功能互补载体的构建 | 第51-52页 |
| 2.3.1 PCR产物和载体的酶切 | 第51页 |
| 2.3.2 酶切产物纯化 | 第51页 |
| 2.3.3 酶切产物的连接 | 第51-52页 |
| 2.4 大肠杆菌的转化与鉴定 | 第52页 |
| 2.5 阳性菌落的测序 | 第52页 |
| 2.6 农杆菌的转化与鉴定 | 第52页 |
| 2.7 拟南芥的转化与鉴定 | 第52页 |
| 3. 实验结果 | 第52-57页 |
| 3.1 目的片段的PCR扩增 | 第52-53页 |
| 3.2 功能互补载体的构建 | 第53-55页 |
| 3.3 拟南芥的转化与鉴定 | 第55页 |
| 3.4 表型互补实验 | 第55-57页 |
| 4.讨论与小结 | 第57-58页 |
| 4.1 讨论 | 第57页 |
| 4.2 小结 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录A:缩略词表 | 第66-67页 |
| 附录B:主要试剂配置 | 第67-69页 |
| 附录C:片段预测图 | 第69-71页 |
| 附录D:BAC质粒酶切电泳图 | 第71-73页 |
| 附录E:大肠杆菌质粒酶切鉴定电泳图 | 第73-74页 |
| 附录F:农杆菌质粒酶切鉴定电泳图 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简历 | 第76页 |