| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 研究背景 | 第9-20页 |
| 1.1 海洋细菌适冷酶研究进展 | 第9-12页 |
| 1.1.1 适冷酶的定义 | 第9-10页 |
| 1.1.2 适冷酶的种类及来源 | 第10页 |
| 1.1.3 适冷酶的适冷催化特征 | 第10-11页 |
| 1.1.4 适冷酶的结构特征 | 第11-12页 |
| 1.2 酶化学修饰的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.2.1 酶化学修饰的目的 | 第12-13页 |
| 1.2.2 酶的侧链基团的修饰 | 第13-14页 |
| 1.2.3 用于化学修饰的试剂 | 第14-15页 |
| 1.2.4 修饰后酶性质的变化 | 第15-17页 |
| 1.3 立题依据 | 第17-18页 |
| 1.4 相关研究基础 | 第18-20页 |
| 第二章 适冷蛋白酶MCP-01序列分析及三维结构模拟 | 第20-38页 |
| 2.1 材料和软件 | 第20页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.1.2 实验软件 | 第20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-21页 |
| 2.2.1 MCP-01的氨基酸序列分析 | 第20-21页 |
| 2.2.2 序列同源性比对和进化树分析 | 第21页 |
| 2.2.3 MCP-01二级结构预测及分析 | 第21页 |
| 2.2.4 MCP-01三级结构模型的构建 | 第21页 |
| 2.3 结果与分析 | 第21-36页 |
| 2.3.1 MCP-01的氨基酸序列分析 | 第21-25页 |
| 2.3.2 MCP-01在subtilase家族中的分类 | 第25-28页 |
| 2.3.3 MCP-01与同源中温酶一级序列的比较 | 第28-31页 |
| 2.3.4 MCP-01二级结构预测 | 第31-32页 |
| 2.3.5 MCP-01三维结构模型的构建 | 第32-34页 |
| 2.3.6 MCP-01三级结构模型中化学修饰相关氨基酸的分布 | 第34-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 MCP-01自溶机制的研究 | 第38-48页 |
| 3.1 试剂与仪器 | 第38-39页 |
| 3.1.1 试剂 | 第38页 |
| 3.1.2 仪器 | 第38-39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-40页 |
| 3.2.1 常规SDS-PAGE | 第39页 |
| 3.2.2 MCP-01自溶速度的分析 | 第39页 |
| 3.2.3 Tricine-SDS-PAGE系统 | 第39-40页 |
| 3.2.4 自溶片断的转膜电泳和N端测序 | 第40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-46页 |
| 3.3.1 自溶片断的电泳分析 | 第40-43页 |
| 3.3.1.1 普通低T值SDS-PAGE的对MCP-01自溶片段的分离 | 第40-41页 |
| 3.3.1.2 普通高T值SDS-PAGE的对MCP-01自溶片段的分离 | 第41-42页 |
| 3.3.1.3 Tricine-SDS-PAGE系统对MCP-01自溶片段的分离 | 第42-43页 |
| 3.3.2 自溶位点的测定 | 第43-46页 |
| 3.4 讨论： | 第46-48页 |
| 第四章 适冷蛋白酶MCP—01化学修饰方法的筛选 | 第48-59页 |
| 4.1 试剂与仪器 | 第50-51页 |
| 4.1.1 蛋白酶 | 第50页 |
| 4.1.2 试剂 | 第50页 |
| 4.1.3 仪器 | 第50-51页 |
| 4.2 试验方法 | 第51-53页 |
| 4.2.1 蛋白酶的纯化 | 第51页 |
| 4.2.2 酶活测定： | 第51-52页 |
| 4.2.3 MCP-01表面氨基修饰 | 第52-53页 |
| 4.2.3.1 还原胺化法 | 第52页 |
| 4.2.3.2 CMC的高碘酸盐氧化法： | 第52页 |
| 4.2.3.3 寡糖的高碘酸盐氧化法 | 第52-53页 |
| 4.2.3.4 戊二醛交联法(对氨基苯甲酸为修饰剂) | 第53页 |
| 4.2.4 热稳定性测定 | 第53页 |
| 4.3 结果及分析 | 第53-57页 |
| 4.3.1 葡萄糖的还原胺化修饰 | 第53-54页 |
| 4.3.2 纤维二糖的还原胺化修饰 | 第54-55页 |
| 4.3.3 高碘酸盐氧化修饰 | 第55-56页 |
| 4.3.4 戊二醛交联修饰 | 第56-57页 |
| 4.3.5 MCP-01表面羧基的修饰—EDC法 | 第57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 戊二醛-葡萄糖胺修饰对MCP-01结构和功能的影响 | 第59-80页 |
| 5.1 材料和方法 | 第59-63页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第59-60页 |
| 5.1.2 试验方法 | 第60-63页 |
| 5.2 结果和分析 | 第63-78页 |
| 5.2.1 最适pH和最适酶活温度 | 第63-64页 |
| 5.2.2 修饰前后MCP-01酶动力学特征的变化 | 第64-67页 |
| 5.2.3 酶的热失活动力学 | 第67-70页 |
| 5.2.4 修饰前后MCP-01紫外吸收光谱的变化 | 第70-72页 |
| 5.2.5 修饰前后MCP-01蛋白内源荧光光谱的变化 | 第72-74页 |
| 5.2.6 修饰前后CD光谱反映出的MCP-01二级结构的变化 | 第74-76页 |
| 5.2.7 酶结构的热变性动力学(以220nm CD光谱为表征) | 第76-78页 |
| 5.3 讨论： | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
