| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-24页 |
| 一 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 甜蛋白的研究进展 | 第11-22页 |
| 1．1 Thaumatin | 第13-15页 |
| 1．2 Monellin | 第15-17页 |
| 1．3 Brazzein | 第17-19页 |
| 1．4 Pentadin | 第19-20页 |
| 1．5 Mabinlin | 第20-21页 |
| 1．6 Curculin | 第21页 |
| 1．7 Miraculin | 第21-22页 |
| 2 甜蛋白的开发前景 | 第22-23页 |
| 二 本论文的立论依据 | 第23-24页 |
| 第二章 植物甜蛋白brazzein基因在大肠杆菌中的表达 | 第24-38页 |
| 一 表达载体的构建 | 第24-32页 |
| 1 材料与方法 | 第24-27页 |
| 1．1 菌株，质粒和限制性内切酶 | 第24-25页 |
| 1．2 PCR引物，基因测序 | 第25页 |
| 1．3 基本实验方法 | 第25-26页 |
| 1．3．1 LB培养基配制 | 第25页 |
| 1．3．2 碱裂解法小量提取质粒DNA | 第25页 |
| 1．3．3 E．coli TG-1感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 1．3．4 质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞 | 第26页 |
| 1．3．5 基因片段或质粒DNA的限制性酶切操作 | 第26页 |
| 1．3．6 Glassmilk法回收DNA片段 | 第26页 |
| 1．3．7 酚：氯仿抽提法回收DNA片段 | 第26页 |
| 1．3．8 目的基因片段和质粒载体连接 | 第26页 |
| 1．4 表达质粒的构建 | 第26-27页 |
| 1．4．1 目的基因的获得 | 第27页 |
| 1．4．2 目的基因SB克隆片段制备 | 第27页 |
| 1．4．3 表达质粒载体制备 | 第27页 |
| 1．4．4 表达质粒构建 | 第27页 |
| 1．4．5 原核表达载体的鉴定 | 第27页 |
| 2 结果与讨论 | 第27-32页 |
| 二 甜蛋白SB基因在大肠杆菌中的表达 | 第32-38页 |
| 1 材料与方法 | 第32-34页 |
| 1．1 菌株和质粒 | 第32页 |
| 1．2 实验方法 | 第32-34页 |
| 1．2．1 蛋白质检测-SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 1．2．2 SB基因在大肠杆菌TG-1中的小规模诱导表达 | 第33页 |
| 1．2．3 表达后融合蛋白的检测 | 第33页 |
| 1．2．4 SB基因在大肠杆菌TG-1中大量培养和诱导表达 | 第33页 |
| 1．2．5 细菌细胞的收集，裂解及表达蛋白的收集 | 第33-34页 |
| 1．2．6 表达蛋白的纯化 | 第34页 |
| 2 结果和讨论 | 第34-37页 |
| 2．1 蛋白质的诱导表达及检测 | 第34-37页 |
| 2．2 目的蛋白的大量诱导表达 | 第37页 |
| 3 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 甜蛋白Brazzein基因植物表达载体的构建 | 第38-55页 |
| 1 实验材料和方法 | 第38-43页 |
| 1．1 菌株和质粒 | 第38页 |
| 1．2 实验基本方法 | 第38页 |
| 1．3 目的基因的获得 | 第38页 |
| 1．4 表达载体的构建 | 第38-43页 |
| 1．4．1 不含引导肽基因的表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 1．4．1．1 目的基因的最初克隆 | 第39页 |
| 1．4．1．2 目的基因表达载体的构建过程 | 第39-40页 |
| 1．4．1．2．1 pBISB2-1的构建过程 | 第39页 |
| 1．4．1．2．2 pBISB2-2的构建过程 | 第39页 |
| 1．4．1．2．3 植物表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 1．4．1．3 表达质粒转化根癌农杆菌 | 第40页 |
| 1．4．2 含引导肽基因和甜蛋白基因的融合表达载体的构建 | 第40-43页 |
| 1．4．2．1 目的基因克隆的获得 | 第40-41页 |
| 1．4．2．2 中间表达载体的构建 | 第41-43页 |
| 1．4．2．2．1 甜蛋白基因和引导肽基因的连接 | 第41页 |
| 1．4．2．2．2 目的基因与GUS基因连接构建双基因表达载体 | 第41-42页 |
| 1．4．2．2．3 转植物基因载体的构建 | 第42-43页 |
| 1．4．2．3 表达载体转化根癌农杆菌 | 第43页 |
| 2 实验结果 | 第43-54页 |
| 2．1 不含引导肽基因的表达载体构建 | 第43-47页 |
| 2．1．1 pBSB的构建 | 第44-45页 |
| 2．1．2 pBISB2-1构建的酶切分析 | 第45-46页 |
| 2．1．3 pBISB2-2构建的酶切分析 | 第46页 |
| 2．1．4 pBGSB的酶切分析 | 第46-47页 |
| 2．2 引导肽基因和甜蛋白基因组成的融合基因的植物表达载体的构建 | 第47-54页 |
| 2．2．1 pUCLSB3-2的构建 | 第50-51页 |
| 2．2．2 pBILSB3-2的构建 | 第51-52页 |
| 2．2．3 pBLSB3-3的构建分析 | 第52-53页 |
| 2．2．4 pBGLSB的构建分析 | 第53-54页 |
| 3 小结 | 第54-55页 |
| 第四章 植物甜蛋白brazzein基因在植物中的遗传转化 | 第55-68页 |
| 一 植物甜蛋白brazzein基因对生菜的遗传转化 | 第56-63页 |
| 1 材料和方法 | 第56-58页 |
| 1．1 植物材料 | 第56页 |
| 1．2 菌株和质粒 | 第56页 |
| 1．3 生菜无菌外植体的获得 | 第56页 |
| 1．4 转化和再生 | 第56-57页 |
| 1．4．1 根癌农杆菌培养 | 第56-57页 |
| 1．4．2 农杆菌浸染和抗性芽的诱导 | 第57页 |
| 1．5 GUS检测 | 第57页 |
| 1．6 转基因植株的PCR检测 | 第57-58页 |
| 1．6．1 转基因植株的DNA提取 | 第57-58页 |
| 1．6．2 转基因植株的PCR扩增鉴定 | 第58页 |
| 2 结果与讨论 | 第58-62页 |
| 2．1 抑制农杆菌的抗生素对诱导生菜愈伤组织及不定芽的影响 | 第58页 |
| 2．2 Kan对诱导生菜愈伤组织及不定芽的影响 | 第58页 |
| 2．3 生菜的愈伤组织诱导及不定芽再生频率 | 第58-59页 |
| 2．4 转基因植株的GUS染色 | 第59-60页 |
| 2．5 GUS阳性小植株的生根及植株的移栽 | 第60-61页 |
| 2．6 转基因植株的PCR鉴定结果 | 第61页 |
| 2．7 转基因植株种子的获得 | 第61-62页 |
| 3 小结 | 第62-63页 |
| 二 植物甜蛋白基因对烟草的遗传转化 | 第63-68页 |
| 1 材料和方法 | 第63-65页 |
| 1．1 植物材料 | 第63页 |
| 1．2 菌株和质粒 | 第63页 |
| 1．3 烟草无菌外植体的获得 | 第63页 |
| 1．4 转化与再生 | 第63-64页 |
| 1．4．1 农杆菌培养 | 第64页 |
| 1．4．2 农杆菌浸染和不定芽诱导 | 第64页 |
| 1．5 转基因植株的GUS检测 | 第64页 |
| 1．6 植株生根及移栽 | 第64页 |
| 1．7 转基因植株的PCR检测 | 第64-65页 |
| 1．7．1 转基因植株的DNA提取 | 第64-65页 |
| 1．7．2 转基因植株的PCR扩增鉴定 | 第65页 |
| 2 结果与讨论 | 第65-67页 |
| 2．1 不定芽的诱导 | 第65页 |
| 2．2 不定芽的GUS染色 | 第65-66页 |
| 2．3 不定芽的生根及植株移栽 | 第66页 |
| 2．4 转基因植株的PCR鉴定 | 第66-67页 |
| 2．5 转基因植株的培养 | 第67页 |
| 3 小结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 英文摘要 | 第73页 |
