| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 玉米遗传转化受体体系 | 第14-16页 |
| 1.1.1 以幼胚为外植体的受体体系 | 第14-15页 |
| 1.1.2 以成熟胚为外植体的受体体系 | 第15页 |
| 1.1.3 以茎尖为外植体的受体体系 | 第15页 |
| 1.1.4 以茎节为外植体的受体体系 | 第15-16页 |
| 1.1.5 植物组培是农杆菌转化的关键技术 | 第16页 |
| 1.2 玉米的遗传转化方法 | 第16-20页 |
| 1.2.1 农杆菌介导法 | 第17-19页 |
| 1.2.2 花粉管通道法 | 第19-20页 |
| 1.2.3 基因枪法 | 第20页 |
| 1.3 多基因共转化法 | 第20-21页 |
| 1.4 转基因检测方法 | 第21-23页 |
| 1.5 体细胞胚胎发生的理论基础 | 第23-24页 |
| 1.5.1 体细胞胚胎发生的几种假说 | 第23页 |
| 1.5.2 植物体细胞胚胎发生的特点 | 第23-24页 |
| 1.5.3 植物体细胞胚胎发生的的分子机制 | 第24页 |
| 1.6 22A 和 Sh2 的研究 | 第24-25页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 第2章 胚胎发生相关基因 Zm22A 的克隆与生物信息学分析 | 第26-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.2 实验药品 | 第27-28页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第27页 |
| 2.2.2 引物及测序 | 第27页 |
| 2.2.3 主要培养基、溶液 | 第27-28页 |
| 2.3 实验仪器 | 第28页 |
| 2.4 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.4.1 玉米体细胞胚胎的获得 | 第28页 |
| 2.4.2 Y423 玉米体细胞胚胎总 RNA 的提取 | 第28-29页 |
| 2.4.3 cDNA 第一链的合成 | 第29-30页 |
| 2.4.4 引物设计 | 第30页 |
| 2.4.5 目的基因的克隆 | 第30-31页 |
| 2.4.6 琼脂糖凝胶目的片段回收 | 第31-32页 |
| 2.4.7 目的片段与克隆载体 pGM‐T 连接 | 第32-33页 |
| 2.4.8 大肠杆菌 TOP10 感受态细胞的制备（CaCl_2法） | 第33页 |
| 2.4.9 重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第33-34页 |
| 2.4.10 质粒 DNA 提取 | 第34-35页 |
| 2.4.11 重组质粒 PCR 鉴定 | 第35页 |
| 2.4.12 重组质粒双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4.13 测序 | 第36页 |
| 2.4.14 生物信息学分析 | 第36页 |
| 2.5 结果与分析 | 第36-48页 |
| 2.5.1 体细胞胚胎的获得 | 第36-37页 |
| 2.5.2 RNA 提取 | 第37-38页 |
| 2.5.3 cDNA 的合成 | 第38-39页 |
| 2.5.4 Zm22A 目的基因的获得 | 第39-41页 |
| 2.5.5 Zm22A 基因测序结果 | 第41页 |
| 2.5.6 结构分析 | 第41-44页 |
| 2.5.7 Zm22A 生物信息学分析 | 第44-48页 |
| 2.6 讨论 | 第48-50页 |
| 2.6.1 体细胞胚胎 | 第48-49页 |
| 2.6.2 Zm22A 基因 | 第49-50页 |
| 第3章 农杆菌转化条件的优化 | 第50-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第50页 |
| 3.1.1 受体材料 | 第50页 |
| 3.2 实验药品及仪器 | 第50-51页 |
| 3.2.1 实验药品 | 第50页 |
| 3.2.2 培养基配方 | 第50-51页 |
| 3.2.3 仪器 | 第51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-53页 |
| 3.3.1 农杆菌侵染幼胚的条件的优化 | 第51-53页 |
| 3.3.2 炼苗时间的选择 | 第53页 |
| 3.4 结果 | 第53-57页 |
| 3.4.1 农杆菌转化条件的优化 | 第53-54页 |
| 3.4.2 抗性愈伤的获得 | 第54-55页 |
| 3.4.3 抗性苗的获得 | 第55-56页 |
| 3.4.4 炼苗时间对再生苗移栽成活率的影响 | 第56-57页 |
| 3.5 讨论 | 第57-59页 |
| 3.5.1 在负压条件下，农杆菌侵染条件的探索 | 第57-58页 |
| 3.5.2 炼苗时间对再生苗移栽成活率的影响 | 第58页 |
| 3.5.3 筛选剂的选择 | 第58-59页 |
| 第4章 胚胎相关基因 Zm22A 的遗传转化 | 第59-72页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第59页 |
| 4.1.2 菌株和植物表达载体 | 第59-60页 |
| 4.1.3 引物 | 第60页 |
| 4.2 实验药品及仪器设备 | 第60-61页 |
| 4.2.1 实验药品 | 第60页 |
| 4.2.2 培养基配方 | 第60-61页 |
| 4.2.3 仪器设备 | 第61页 |
| 4.3 实验方法 | 第61-66页 |
| 4.3.1 植物表达载体构建 | 第61-63页 |
| 4.3.2 农杆菌培养 | 第63-64页 |
| 4.3.3 Zm22A 基因的农杆菌介导 | 第64-65页 |
| 4.3.4 由愈伤诱导分化率的统计 | 第65页 |
| 4.3.5 DNA 提取 | 第65-66页 |
| 4.3.6 PCR 检测 | 第66页 |
| 4.4 实验结果 | 第66-70页 |
| 4.4.1 植物表达载体构建 | 第66-67页 |
| 4.4.2 侵染后愈伤分化率的统计 | 第67-69页 |
| 4.4.3 DNA 提取 | 第69页 |
| 4.4.4 PCR 检测 | 第69-70页 |
| 4.5 讨论 | 第70-72页 |
| 4.5.1 幼胚的准备 | 第70页 |
| 4.5.2 农杆菌侵染过程中所用的培养基配方 | 第70-71页 |
| 4.5.3 农杆菌侵染后愈伤分化率的统计 | 第71-72页 |
| 第5章 玉米淀粉合成相关基因 ZmSh2 的遗传转化 | 第72-82页 |
| 5.1 实验材料 | 第72-73页 |
| 5.1.1 受体材料 | 第72页 |
| 5.1.2 菌株和表达载体 | 第72-73页 |
| 5.2 实验药品及仪器设备 | 第73页 |
| 5.2.1 实验药品 | 第73页 |
| 5.2.2 培养基配方： | 第73页 |
| 5.2.3 仪器设备 | 第73页 |
| 5.3 实验方法 | 第73-76页 |
| 5.3.1 农杆菌的培养 | 第73页 |
| 5.3.2 幼胚的准备 | 第73-74页 |
| 5.3.3 农杆菌介导转化 | 第74页 |
| 5.3.4 分子检测 | 第74-76页 |
| 5.4 结果分析 | 第76-79页 |
| 5.4.1 农杆菌介导转化幼胚 | 第76-77页 |
| 5.4.2 PCR 检测 | 第77-79页 |
| 5.4.3 T0代种子的获得 | 第79页 |
| 5.5 讨论 | 第79-82页 |
| 5.5.1 ZmSh2 基因 | 第79-80页 |
| 5.5.2 启动子 RP5 | 第80页 |
| 5.5.3 阳性苗形态不正常 | 第80-82页 |
| 第6章 全文结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-93页 |
| 作者简介 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
