成年母猪后肠木聚糖降解菌分离鉴定及相关基因克隆
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-20页 |
| ·木聚糖酶 | 第11-14页 |
| ·木聚糖 | 第11页 |
| ·木聚糖酶、木聚糖酶多样性及其分类 | 第11-12页 |
| ·木聚糖酶的理化性质、结构及合成调节 | 第12-14页 |
| ·影响木聚糖酶活性因素 | 第14页 |
| ·产木聚糖酶微生物种类、筛选及基因克隆 | 第14-18页 |
| ·产木聚糖酶微生物 | 第15页 |
| ·不同环境中产木聚糖酶菌株的筛选 | 第15-16页 |
| ·木聚糖酶全长基因获得 | 第16-18页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第18页 |
| ·研究目的意义、技术路线和未来研究展望 | 第18-20页 |
| ·目的和意义 | 第18-19页 |
| ·技术路线 | 第19页 |
| ·未来研究展望 | 第19-20页 |
| 第二章 成年母猪后肠木聚糖酶生产菌的筛选及鉴定 | 第20-30页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·母猪肠道样品采集 | 第20页 |
| ·工具酶与试剂 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·引物合成和核苷酸测序 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-24页 |
| ·木聚糖降解菌株筛选及分离 | 第21-22页 |
| ·筛选菌16S rDNA 鉴定 | 第22-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-27页 |
| ·产木聚糖酶菌株的筛选分离 | 第24页 |
| ·菌种复筛 | 第24-25页 |
| ·产木聚糖酶筛选菌的鉴定 | 第25-27页 |
| ·讨论 | 第27-29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 第三章 ZF 和MZ 对饲草降解作用的研究 | 第30-39页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·菌体和饲草 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·主要溶液 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-32页 |
| ·饲草处理 | 第31页 |
| ·细菌活化 | 第31页 |
| ·细菌混合饲草培养基的驯化培养 | 第31-32页 |
| ·ZF 和MZ 生长和产酶曲线 | 第32页 |
| ·ZF 和MZ 对3 种饲草降解能力研究 | 第32页 |
| ·ZF 和MZ 对滤纸降解情况 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-37页 |
| ·标准曲线 | 第32-33页 |
| ·培养时间和碳源对ZF 生长和产酶情况的影响 | 第33-34页 |
| ·培养时间和碳源对MZ 生长和产酶情况的影响 | 第34-35页 |
| ·筛选菌ZF 和MZ 细菌对３种饲草的降解 | 第35-36页 |
| ·筛选菌ZF、MZ 对滤纸降解情况 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第四章 ZF 和MZ 木聚糖酶酶学性质研究 | 第39-48页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·木聚糖酶粗酶 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·溶液和试剂 | 第39-40页 |
| ·仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-42页 |
| ·木聚糖酶粗酶提取 | 第40页 |
| ·木聚糖酶最适温度 | 第40页 |
| ·木聚糖酶最适pH | 第40页 |
| ·木聚糖酶pH 稳定性 | 第40-41页 |
| ·蛋白酶对木聚糖酶活性的影响 | 第41页 |
| ·金属离子对木聚糖酶活性的影响 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-45页 |
| ·ZF 和MZ 木聚糖酶最适温度 | 第42页 |
| ·ZF 和MZ 木聚糖酶最适pH | 第42-43页 |
| ·ZF 和MZ 木聚糖酶pH 稳定性 | 第43页 |
| ·胃蛋白酶对ZF 和MZ 木聚糖酶活性的影响 | 第43-44页 |
| ·胰蛋白酶对ZF 和MZ 木聚糖酶活性的影响 | 第44页 |
| ·金属离子对ZF 和MZ 木聚糖酶活性的影响 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第五章 ZF 和MZ 木聚糖酶基因克隆 | 第48-60页 |
| ·试验材料 | 第48-50页 |
| ·菌种和质粒载体 | 第48页 |
| ·工具酶及试剂 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48-49页 |
| ·引物合成 | 第49-50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50-55页 |
| ·木聚糖酶基因片段获得 | 第50-51页 |
| ·目的条带分离纯化 | 第51页 |
| ·目的片段连接 | 第51-52页 |
| ·连接产物转化及阳性克隆挑取 | 第52页 |
| ·测序与序列分析 | 第52页 |
| ·全长木聚糖酶基因的获得 | 第52-54页 |
| ·全长木聚糖酶基因的拼接和分析 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-58页 |
| ·第10 和第11 家族木聚糖酶基因片段获得 | 第55页 |
| ·11ZF 和10MZ 验证 | 第55-56页 |
| ·11ZF 和10MZ 3’未知序列扩增 | 第56-57页 |
| ·11ZF 和10MZ 5’未知序列扩增 | 第57页 |
| ·11ZF 和10MZ 延长序列拼接及验证 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第六章结论 | 第60-61页 |
| ·主要结论 | 第60页 |
| ·创新点 | 第60页 |
| ·待解决问题 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录1 木聚糖酶测定方法 | 第69-72页 |
| 附录2 纤维素酶测定方法 | 第72-74页 |
| 附录3 论文涉及核苷酸序列 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简介 | 第81页 |
