| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 符号与缩略语说明 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 磺酰脲除草剂以及其降解 | 第14-24页 |
| 1.1 磺酰脲除草剂 | 第14-22页 |
| 1.1.1 磺酰脲除草剂简介 | 第14-16页 |
| 1.1.2 磺酰脲除草剂的除草作用机理 | 第16-18页 |
| 1.1.3 磺酰脲除草剂对农作物和环境的影响 | 第18-20页 |
| 1.1.4 磺酰脲除草剂的降解机制 | 第20-22页 |
| 1.2 构建磺酰脲除草剂降解工程菌株的意义 | 第22-24页 |
| 第二章 磺酰脲类除草剂降解工程菌株的构建 | 第24-40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-32页 |
| 2.1.1 菌株质粒及培养基 | 第25页 |
| 2.1.2 试剂和培养基 | 第25页 |
| 2.1.3 S113菌体总DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.1.4 sulE基因,启动子PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.1.5 PCR产物的纯化 | 第27页 |
| 2.1.6 重叠延伸PCR | 第27-28页 |
| 2.1.7 重叠延伸产物的纯化回收 | 第28-29页 |
| 2.1.8 质粒DNA的小量提取 | 第29页 |
| 2.1.9 质粒和重叠延伸片段的双酶切 | 第29-30页 |
| 2.1.10 酶连 | 第30页 |
| 2.1.11 酶连产物电转化到KT2440中 | 第30-31页 |
| 2.1.12 挑选转化子验证 | 第31-32页 |
| 2.1.13 转化子对噻吩磺隆降解效果的初步验证 | 第32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.2.1 sulE基因,启动子PCR扩增及重叠延伸PCR | 第33-34页 |
| 2.2.2 广宿主载体pBBR1MCS-5以及重叠延伸片段双酶切 | 第34-35页 |
| 2.2.3 转化子磺酰脲除草剂去酯化酶基因PCR扩增验证 | 第35-36页 |
| 2.2.4 转化子质粒提取酶切验证 | 第36-37页 |
| 2.2.5 基因测序与比对 | 第37页 |
| 2.2.6 转化子对噻吩磺隆降解效果的初步验证 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-39页 |
| 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 工程菌的降解特性研究及其在污染土壤生物修复中的初步应用 | 第40-56页 |
| 3.1 材料与方法 | 第40-43页 |
| 3.1.1 供试菌株和植物 | 第40页 |
| 3.1.2 试剂与培养基 | 第40-41页 |
| 3.1.3 供试土壤 | 第41页 |
| 3.1.4 噻吩磺隆的提取和测定 | 第41页 |
| 3.1.5 噻吩磺隆降解速率与菌株生长测定 | 第41-42页 |
| 3.1.6 液体条件下环境因素对工程菌降解噻吩磺隆影响的研究 | 第42页 |
| 3.1.7 土壤中环境条件对工程菌降解噻吩磺隆影响的研究 | 第42页 |
| 3.1.8 降解菌剂盆钵试验对玉米药害的解除作用 | 第42-43页 |
| 3.1.9 工程菌稳定性分析 | 第43页 |
| 3.2 结果与分析 | 第43-53页 |
| 3.2.1 噻吩磺隆降解速率与菌株生长的关系 | 第43-46页 |
| 3.2.2 液体条件下环境因素对噻吩磺隆降解的影响 | 第46-49页 |
| 3.2.3 土壤中噻吩磺隆降解影响因素 | 第49-52页 |
| 3.2.4 降解菌剂盆钵试验对玉米药害的解除作用 | 第52-53页 |
| 3.2.5 工程菌稳定性分析 | 第53页 |
| 3.3 讨论 | 第53-54页 |
| 本章小结 | 第54-56页 |
| 第四章 无标记基因工程菌的的构建 | 第56-68页 |
| 4.1 材料与方法 | 第57-61页 |
| 4.1.1 所用菌株与质粒 | 第58页 |
| 4.1.2 磺酰脲除草剂去酯化酶基因的PCR扩增 | 第58-59页 |
| 4.1.3 随机整合质粒pUTTnsKm的提取和酶切 | 第59页 |
| 4.1.4 酶切产物末端脱磷 | 第59页 |
| 4.1.5 酶连 | 第59页 |
| 4.1.6 重组质粒转化E.coli DH5α_(λpir) | 第59-60页 |
| 4.1.7 工程菌的构建 | 第60页 |
| 4.1.8 工程菌的生长和对噻吩磺隆的降解情况研究 | 第60页 |
| 4.1.9 降解菌剂盆钵试验对玉米药害的解除作用 | 第60-61页 |
| 4.1.10 工程菌稳定性分析 | 第61页 |
| 4.2 结果与分析 | 第61-66页 |
| 4.2.1 sulEp基因的PCR扩增 | 第61页 |
| 4.2.2 随机整合质粒pUTTnsKm的提取和酶切 | 第61-62页 |
| 4.2.3 重组质粒的构建及转化E.coli DH5a_(λpir) | 第62-63页 |
| 4.2.4 工程菌的构建 | 第63页 |
| 4.2.5 工程菌的生长和对噻吩磺隆的降解情况研究 | 第63-65页 |
| 4.2.6 降解菌剂盆钵试验对玉米药害的解除作用 | 第65-66页 |
| 4.2.7 工程菌稳定性分析 | 第66页 |
| 4.3 讨论 | 第66-67页 |
| 本章小结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 全文总结 | 第72-74页 |
| 附录 | 第74-80页 |
| 附录一 实验用培养基及分子生物学试剂 | 第74-76页 |
| 附录二 相关基因序列 | 第76-78页 |
| 附录三 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
