| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 论文创新点 | 第16-17页 |
| 研究意义 | 第17-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-49页 |
| 第一章 狂犬病病毒的研究现状 | 第18-29页 |
| 1 狂犬病病毒的基因组结构 | 第18-19页 |
| 2 狂犬病病毒粒子的结构 | 第19-20页 |
| 3 狂犬病病毒的生活周期 | 第20-22页 |
| 4 狂犬病病毒结构蛋白的功能 | 第22-29页 |
| 4.1 N蛋白 | 第22-23页 |
| 4.2 P蛋白 | 第23-24页 |
| 4.3 G蛋白 | 第24-25页 |
| 4.4 L蛋白 | 第25-26页 |
| 4.5 M蛋白 | 第26-29页 |
| 4.5.1 M蛋白调控病毒的转录和复制 | 第26-27页 |
| 4.5.2 M蛋白促进病毒粒子的组装和出芽 | 第27页 |
| 4.5.3 M蛋白诱导细胞凋亡 | 第27-28页 |
| 4.5.4 M蛋白影响病毒的致病力 | 第28-29页 |
| 第二章 病毒调控线粒体凋亡的研究进展 | 第29-37页 |
| 1 细胞凋亡的主要通路 | 第30-32页 |
| 1.1 线粒体凋亡通路 | 第30-31页 |
| 1.2 死亡受体凋亡通路 | 第31-32页 |
| 2 宿主蛋白对线粒体凋亡通路的调控 | 第32-34页 |
| 2.1 Bcl-2蛋白家族对线粒体凋亡通路的调控 | 第32-33页 |
| 2.2 IAPs蛋白家族对线粒体凋亡通路的调控 | 第33-34页 |
| 3 病毒蛋白对线粒体凋亡通路的调控 | 第34-37页 |
| 3.1 病毒蛋白直接诱导线粒体膜透化,促进细胞凋亡 | 第34-35页 |
| 3.2 病毒蛋白间接诱导线粒体膜透化,促进细胞凋亡 | 第35页 |
| 3.3 病毒编码Bcl-2同源蛋白,抑制线粒体凋亡通路 | 第35-36页 |
| 3.4 病毒通过其他机制,抑制线粒体凋亡通路 | 第36-37页 |
| 第三章 病毒利用细胞微丝骨架的研究进展 | 第37-43页 |
| 1 细胞微丝的调控 | 第37-40页 |
| 1.1 肌动蛋白结合蛋白对微丝的调控 | 第37-38页 |
| 1.2 Rho-GTPases家族蛋白对微丝的调控 | 第38-40页 |
| 2 细胞微丝在病毒感染过程中的作用 | 第40-43页 |
| 2.1 细胞微丝与病毒入胞 | 第40-41页 |
| 2.2 细胞微丝与病毒核迁移 | 第41-42页 |
| 2.3 细胞微丝与病毒的组装、释放 | 第42-43页 |
| 第四章 病毒利用细胞微管骨架的研究进展 | 第43-49页 |
| 1 细胞微管的调控 | 第43-47页 |
| 1.1 微管结合蛋白对微管的调控 | 第43-44页 |
| 1.2 翻译后修饰对微管的调控 | 第44-47页 |
| 1.2.1 微管的酪氨酸化和去酪氨酸化修饰 | 第45-46页 |
| 1.2.2 微管的△2修饰 | 第46页 |
| 1.2.3 微管的乙酰化和去乙酰化修饰 | 第46-47页 |
| 2 细胞微管在病毒感染过程中的作用 | 第47-49页 |
| 2.1 微管与病毒胞内运输 | 第47-48页 |
| 2.2 微管与病毒的转录和复制 | 第48-49页 |
| 第二部分 研究内容 | 第49-118页 |
| 第一章 RABV-M蛋白诱导细胞凋亡的功能研究 | 第49-82页 |
| 1 实验材料 | 第50-52页 |
| 1.1 主要仪器与器材 | 第50-51页 |
| 1.2 细胞、毒株和试剂 | 第51-52页 |
| 2 实验方法 | 第52-59页 |
| 2.1 细胞活性检测试验 | 第52页 |
| 2.2 细胞ATP水平检测试验 | 第52-53页 |
| 2.3 乳酸脱氢酶(LDH)检测试验 | 第53页 |
| 2.4 TUNEL细胞凋亡检测试验 | 第53-54页 |
| 2.5 线粒体膜电位检测试验 | 第54页 |
| 2.6 Caspase-3、-8、-9活性检测试验 | 第54-55页 |
| 2.7 真核表达质粒构建和转染 | 第55页 |
| 2.8 抗RABV-M蛋白鼠多抗的制备 | 第55-57页 |
| 2.8.1 RABV-M蛋白的B细胞抗原表位的预测 | 第55-56页 |
| 2.8.2 RABV-M蛋白多肽的合成 | 第56页 |
| 2.8.3 多肽的溶解保存和偶联 | 第56页 |
| 2.8.4 动物免疫 | 第56-57页 |
| 2.9 间接免疫荧光(IFA) | 第57页 |
| 2.10 SDS-PAGE电泳及Western-blot | 第57-58页 |
| 2.11 激光共聚焦显微镜和N-随机光学重构显微系统分析 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-79页 |
| 3.1 RABV感染诱导细胞凋亡 | 第59-60页 |
| 3.2 RABV感染激活细胞线粒体凋亡通路 | 第60-62页 |
| 3.3 RABV感染破坏细胞线粒体膜电势,释放cyto c | 第62-64页 |
| 3.4 RABV感染激活AIF并诱导AIF入核 | 第64-66页 |
| 3.5 RABV感染抑制Bax激活 | 第66-69页 |
| 3.6 单独表达RABV-M诱导细胞凋亡 | 第69-70页 |
| 3.7 M蛋白激活线粒体凋亡通路 | 第70-72页 |
| 3.8 M蛋白B细胞抗原表位的预测分析 | 第72-73页 |
| 3.9 RABV-M蛋白多克隆抗体的制备 | 第73-74页 |
| 3.10 M蛋白在RABV感染的N2a细胞中的亚细胞分布 | 第74-75页 |
| 3.11 M蛋白的线粒体定位序列分析 | 第75-79页 |
| 4 讨论 | 第79-82页 |
| 第二章 RABV-M蛋白介导病毒出芽依赖于微丝骨架的研究 | 第82-99页 |
| 1 材料和方法 | 第83-84页 |
| 1.1 主要仪器与器材 | 第83页 |
| 1.2 细胞、毒株和试剂 | 第83-84页 |
| 2 实验方法 | 第84-86页 |
| 2.1 病毒接种和药物处理 | 第84页 |
| 2.2 细胞活性检测试验 | 第84页 |
| 2.3 IFA测定病毒TCID_(50) | 第84页 |
| 2.4 SDS-PAGE电泳及Western-blot | 第84-85页 |
| 2.5 激光共聚焦显微镜分析 | 第85页 |
| 2.6 荧光定量PCR (qRT-PCR) | 第85页 |
| 2.7 真核表达质粒构建和转染 | 第85-86页 |
| 3 结果 | 第86-97页 |
| 3.1 破坏微丝骨架对RABV感染的影响 | 第86-88页 |
| 3.2 破坏微丝骨架对RABV粒子出芽的影响 | 第88-91页 |
| 3.3 RABV感染对微丝调控蛋白Cofilin的影响 | 第91-92页 |
| 3.4 Cofilin敲低对RABV出芽的影响 | 第92-95页 |
| 3.5 过表达Cofilin对RABV出芽影响 | 第95-97页 |
| 4 讨论 | 第97-99页 |
| 第三章 RABV-M蛋白诱导微管解聚的功能研究 | 第99-118页 |
| 1 材料和方法 | 第100-101页 |
| 1.1 主要仪器与器材 | 第100页 |
| 1.2 细胞、毒株和试剂 | 第100-101页 |
| 2 实验方法 | 第101-102页 |
| 2.1 病毒接种和药物处理 | 第101页 |
| 2.2 细胞活性检测试验 | 第101页 |
| 2.3 SDS-PAGE电泳及Western-blot | 第101页 |
| 2.4 质粒转染 | 第101页 |
| 2.5 激光共聚焦显微镜分析 | 第101页 |
| 2.6 荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第101-102页 |
| 3 结果 | 第102-116页 |
| 3.1 RABV感染诱导微管骨架解聚 | 第102-104页 |
| 3.2 微管解聚对RABV转录和复制的影响 | 第104-106页 |
| 3.3 微管稳定对RABV转录和复制的影响 | 第106-108页 |
| 3.4 RABV感染下调微管的乙酰化修饰水平 | 第108-110页 |
| 3.5 抑制HDAC6的去乙酰化酶活性对RABV转录和复制的影响 | 第110-113页 |
| 3.6 单独表达病毒M蛋白诱导微管解聚 | 第113-116页 |
| 4 讨论 | 第116-118页 |
| 全文总结 | 第118-119页 |
| 展望 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-137页 |
| 第三部分 附录 | 第137-144页 |
| 附录A 本文涉及的引物及重组质粒 | 第137-138页 |
| 附录B 全文缩略语 | 第138-140页 |
| 附录C 常用缓冲液及配方 | 第140-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
| 作者简历 | 第145页 |
