| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-32页 |
| 1 灰葡萄孢和灰霉病 | 第12-19页 |
| 1.1 灰葡萄孢的经济重要性 | 第12-13页 |
| 1.2 灰葡萄孢的分类属性 | 第13页 |
| 1.3 灰葡萄孢的生物学特性 | 第13-14页 |
| 1.4 灰霉病的病害循环 | 第14-15页 |
| 1.5 灰霉病的防治 | 第15-19页 |
| 1.5.1 病害发生原因 | 第15页 |
| 1.5.2 农业防治 | 第15-16页 |
| 1.5.3 物理防治 | 第16-17页 |
| 1.5.4 化学防治 | 第17页 |
| 1.5.5 生物防治 | 第17-19页 |
| 2 细胞自噬（autophagy） | 第19-30页 |
| 2.1 细胞自噬概述 | 第19页 |
| 2.2 细胞自噬的类型 | 第19-21页 |
| 2.3 酵母中细胞自噬过程 | 第21-27页 |
| 2.3.1 自噬的诱导与抑制 | 第24-25页 |
| 2.3.2 囊泡的成核（Nucleation） | 第25-26页 |
| 2.3.3 囊泡的膨大（Expansion） | 第26页 |
| 2.3.4 自噬体与液泡的融合（Fusion） | 第26-27页 |
| 2.3.5 自噬小体在液泡中的降解（Breakdown） | 第27页 |
| 2.4 细胞自噬的主要研究方法 | 第27-28页 |
| 2.4.1 自噬缺失突变体的获得 | 第27页 |
| 2.4.2 透射电镜观察 | 第27页 |
| 2.4.3 单丹磺酰尸胺（Monodansyleadaverin，MDC）染色 | 第27-28页 |
| 2.4.4 荧光标记 | 第28页 |
| 2.5 子囊真菌中自噬的研究进展 | 第28-30页 |
| 2.5.1 细胞自噬对子囊菌细胞分化的影响 | 第28-29页 |
| 2.5.2 细胞自噬对子囊菌致病力的影响 | 第29-30页 |
| 3 本研究的意义和内容 | 第30-32页 |
| 3.1 研究的意义 | 第30-31页 |
| 3.2 研究的内容 | 第31-32页 |
| 第二章 灰葡萄孢细胞自噬相关基因BcATG26、BcATG17和BcATG14的序列分析和表达模式分析 | 第32-42页 |
| 1 试验材料 | 第32-33页 |
| 1.1 供试菌株 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 1.3 主要培养基 | 第33页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第33页 |
| 2 试验方法 | 第33-35页 |
| 2.1 构建系统进化树 | 第33-34页 |
| 2.2 菌丝准备及核酸提取 | 第34页 |
| 2.3 cDNA的合成 | 第34页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR分析 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-41页 |
| 3.1 基因BcATG26、BcATG17和BcATG14的序列分析 | 第35-37页 |
| 3.2 基于BcATG26、BcATG17和BcATG14基因的系统进化树分析 | 第37-39页 |
| 3.3 基因BcATG26、BcATG17和BcATG14的表达模式 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 灰葡萄孢细胞自噬相关基因BcATG26、BcATG17和BcATG14的功能研究 | 第42-72页 |
| 1 试验材料 | 第42-44页 |
| 1.1 供试菌株 | 第42页 |
| 1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 1.3 主要培养基 | 第42-43页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第43-44页 |
| 2 试验方法 | 第44-49页 |
| 2.1 原生质体的制备 | 第44页 |
| 2.2 基因敲除及敲除转化子的获得 | 第44-47页 |
| 2.2.1 基因敲除（Split-marker）策略 | 第44-45页 |
| 2.2.2 PCR扩增 | 第45-46页 |
| 2.2.3 原生质体PEG介导转化 | 第46-47页 |
| 2.3 敲除转化子的获得与验证 | 第47页 |
| 2.4 敲除转化子的生物学特性 | 第47-48页 |
| 2.4.1 敲除转化子生长速度的测定 | 第47页 |
| 2.4.2 敲除转化子对H_2O_2胁迫的反应 | 第47页 |
| 2.4.3 敲除转化子对植保素camalexin胁迫的反应 | 第47-48页 |
| 2.5 致病力测定 | 第48页 |
| 2.5.1 活体植物接种 | 第48页 |
| 2.5.2 离体叶片接种 | 第48页 |
| 2.6 自噬结构的观察 | 第48-49页 |
| 2.6.1 激光共聚焦显微镜观察 | 第48页 |
| 2.6.2 透射电镜观察 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-70页 |
| 3.1 基因BcATG26、BcATG17和BcATG14敲除转化子的筛选和验证 | 第49-52页 |
| 3.2 敲除转化子表型分析 | 第52-64页 |
| 3.2.1 敲除转化子在PDA培养基上的生长情况 | 第52-53页 |
| 3.2.2 敲除转化子在 1/8 PDA培养基上的生长情况 | 第53-54页 |
| 3.2.3 敲除转化子在PDB和 1/8 PDB中摇培p H值变化及菌丝干重 | 第54-55页 |
| 3.2.4 敲除转化子在DM、DM-C和DM-N上的生长情况 | 第55-57页 |
| 3.2.5 敲除转化子对H_2O_2胁迫的反应 | 第57-60页 |
| 3.2.6 敲除转化子对植保素camalexin胁迫的反应 | 第60-62页 |
| 3.2.7 敲除转化子对混合的H_2O_2 + camalexin胁迫的反应 | 第62-64页 |
| 3.3 敲除转化子致病力测定 | 第64-66页 |
| 3.3.1 离体叶片接种 | 第64-65页 |
| 3.3.2 活体植物接种 | 第65-66页 |
| 3.4 细胞自噬结构的观察 | 第66-70页 |
| 3.4.1 MDC染色 | 第66-69页 |
| 3.4.2 透射电镜观察 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 4.1 细胞自噬与灰葡萄孢菌核形成和发育的联系 | 第70页 |
| 4.2 细胞自噬与灰葡萄孢致病力的联系 | 第70页 |
| 4.3 细胞自噬与灰葡萄孢抗H_2O_2和植保素camalexin胁迫的联系 | 第70-71页 |
| 4.4 自噬结构的观察 | 第71-72页 |
| 第四章 全文总结和展望 | 第72-74页 |
| 1 全文总结 | 第72页 |
| 2 展望 | 第72-74页 |
| 2.1 进一步探索自噬与灰葡萄孢菌核的形成和发育的联系 | 第72页 |
| 2.2 进一步探索自噬与灰葡萄孢耐受ROS和植保素的分子机理 | 第72页 |
| 2.3 进一步研究自噬与灰葡萄孢致病力的联系 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-85页 |
| 附录1 本研究涉及的试剂和试验方法 | 第85-94页 |
| 附录2 基因序列、基因左右臂序列和Hyg序列 | 第94-100页 |
| 附录3 本研究所用引物 | 第100-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
