中文摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
主要缩略词表 | 第13-15页 |
前言 | 第15-16页 |
第一章 文献综述 | 第16-45页 |
1.1 microRNA研究进展 | 第16-24页 |
microRNA的发现 | 第16-18页 |
经典miRNA的转录及生成通路 | 第18-21页 |
非传统的miRNA作用机制研究最新进展 | 第21-24页 |
1.2 miRNA功能与神经系统 | 第24-39页 |
miRNA与神经系统关系 | 第24-27页 |
miRNA与神经系统疾病关系 | 第27-28页 |
果蝇miRNA研究进展 | 第28-33页 |
果蝇miRNA方法学研究概要 | 第33-39页 |
1.3 miR-932及Neuroligin2分子 | 第39-43页 |
miR-932基因家族 | 第39-41页 |
Neuroligin分子简介 | 第41-43页 |
1.4 内含子microRNA与宿主基因关系 | 第43-44页 |
1.5 展望 | 第44-45页 |
第二章 实验材料与方法 | 第45-55页 |
2.1 果蝇品系和转基因果蝇的制备 | 第45-48页 |
2.1.1 果蝇品系 | 第45页 |
2.1.2 转基因果蝇pUAST-miR-932制备 | 第45-48页 |
2.2 DNA质粒载体及引物序列 | 第48页 |
2.3 生物信息学分析工具及统计分析 | 第48页 |
2.4 细胞培养、转染及双荧光素酶报告基因系统 | 第48-49页 |
2.5 Western blot免疫印记 | 第49页 |
2.6 RNA提取及real-time qRT-PCR | 第49-51页 |
2.7 microRNA原位杂交 | 第51-52页 |
2.8 免疫荧光染色 | 第52-54页 |
2.9 果蝇运动能力的测试 | 第54-55页 |
第三章 实验结果与讨论 | 第55-97页 |
3.1 内含子miR-932的鉴定与表达谱分析 | 第55-62页 |
3.1.1 dnlg2内含子区包含一个昆虫特异的miR-932 | 第55-56页 |
3.1.2 miR-932在果蝇神经系统高表达 | 第56-60页 |
3.1.3 小节与讨论 | 第60-62页 |
3.2 miR-932通过靶向CDS编码区调控宿主基因dnlg2表达 | 第62-68页 |
3.2.1 miR-932可以靶向宿主基因dnlg2的编码区 | 第62页 |
3.2.2 miR-932和dnlg2编码区互作 | 第62-64页 |
3.2.3 miR-932直接抑制dnlg2表达 | 第64-65页 |
3.2.4 miR-932主要通过CDSsite1调节dnlg2的表达 | 第65-66页 |
3.2.5 小节与讨论 | 第66-68页 |
3.3 过表达miR-932导致果蝇突触生长发育缺陷 | 第68-77页 |
3.3.1 转基因UAS-miR-932果蝇的制备 | 第68-69页 |
3.3.2 过表达miR-932后初步表型分析 | 第69-72页 |
3.3.3 神经过表达miR-932引起突触形态异常 | 第72-74页 |
3.3.4 神经过表达miR-932导致突触传递异常 | 第74-76页 |
3.3.5 小节与讨论 | 第76-77页 |
3.4 miR-932突变体果蝇鉴定及功能分析 | 第77-86页 |
3.4.1 miR-932敲除突变体的制备 | 第77-78页 |
3.4.2 miR-932敲除、敲低后DNlg2及GluRⅡB表达量变化 | 第78-79页 |
3.4.3 miR-932参与抑制果蝇成虫运动活性 | 第79-81页 |
3.4.4 miR-932其它靶标筛选及功能分析 | 第81-84页 |
3.4.5 小节与讨论 | 第84-86页 |
3.5 内含子miRNA可通过CDS编码区调控宿主基因表达 | 第86-92页 |
3.5.1 果蝇内含子miRNA可以靶向其宿主基因编码区 | 第86-88页 |
3.5.2 人类内含子区miRNA靶向其宿主基因编码区 | 第88-90页 |
3.5.3 Neurexin-1可以被其外显子编码的miR-4952作用于编码区 | 第90-92页 |
3.6 全文总结与讨论 | 第92-97页 |
3.6.1 内含子miR-932与宿主dnlg2在转录水平的关系 | 第92-93页 |
3.6.2 内含子miR-932通过靶向CDS区调节宿主dnlg2表达及功能 | 第93-94页 |
3.6.3 位于CDS区的miRNA靶标序列不同于传统3'UTR的生物学意义 | 第94-95页 |
3.6.4 基因内miRNA直接靶向宿主基因CDS区可能是基因组中广泛存在的事件 | 第95-97页 |
参考文献 | 第97-107页 |
附录 | 第107-115页 |
附表1 本论文所用引物序列及用途 | 第107-109页 |
附表2 果蝇基因组中的内含子miRNA/宿主mRNA对及靶标关系预测结果 | 第109-114页 |
附表3 在miR-932上游发现的RNA聚合酶Ⅲ识别基序 | 第114-115页 |
作者简介 | 第115-116页 |
致谢 | 第116页 |