| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 第一部分：K-ras重组质粒的构建及其在人胰腺癌Bxpc-3细胞中稳定表达细胞株的建立 | 第16-29页 |
| 1, 实验材料 | 第16-19页 |
| 1.1 试剂 | 第16-17页 |
| 1.2 抗体 | 第17页 |
| 1.3 仪器 | 第17页 |
| 1.4 实验材料的制备 | 第17-19页 |
| 2, 实验方法 | 第19-25页 |
| 2.1 细胞培养 | 第19页 |
| 2.2 质粒的构建 | 第19-21页 |
| 2.3 转化及大肠杆菌的培养 | 第21页 |
| 2.4 质粒的抽提及定量 | 第21-22页 |
| 2.5 转染 | 第22-23页 |
| 2.6 稳转株的筛选 | 第23页 |
| 2.7 荧光显微镜观察转染效率 | 第23页 |
| 2.8 Western blot法测定蛋白含量 | 第23-25页 |
| 3, 实验结果 | 第25-28页 |
| 3.1 质粒的验证 | 第25页 |
| 3.2 细胞形态 | 第25-26页 |
| 3.3 阳性克隆的筛选 | 第26-28页 |
| 4, 讨论 | 第28-29页 |
| 第二部分：不同K-ras基因型的Bxpc-3稳转株的功能鉴定及胰腺癌常用药物的药效学研究 | 第29-40页 |
| 1, 实验材料 | 第29页 |
| 2, 实验方法 | 第29-31页 |
| 2.1 MTT法测细胞存活 | 第29-30页 |
| 2.2 生长曲线测定方法 | 第30页 |
| 2.3 MTT法测药物药效 | 第30页 |
| 2.4 克隆元法测多西他赛的长期药效 | 第30-31页 |
| 3, 实验结果 | 第31-37页 |
| 3.1 生长曲线 | 第31页 |
| 3.2 下游信号表达 | 第31-32页 |
| 3.3 抗肿瘤药物药效与K-ras突变的关系 | 第32-36页 |
| 3.4 多西他赛长期药效 | 第36-37页 |
| 4, 讨论 | 第37-40页 |
| 第三部分：多西他赛在K-ras突变Bxpc-3细胞上耐药机制研究 | 第40-50页 |
| 1, 实验材料 | 第40-41页 |
| 1.1 试剂 | 第40-41页 |
| 1.2 溶液的配置 | 第41页 |
| 2, 实验方法 | 第41-43页 |
| 2.1 细胞周期的检测方法 | 第41页 |
| 2.2 DAPI单染检测细胞凋亡 | 第41-42页 |
| 2.3 细胞凋亡蛋白PARP的检测 | 第42页 |
| 2.4 siRNA干扰实验 | 第42页 |
| 2.5 siRNA干扰对下游信号及细胞凋亡的影响 | 第42-43页 |
| 2.6 MEK/ERK抑制剂对多西他赛药效的影响 | 第43页 |
| 3, 实验结果 | 第43-49页 |
| 3.1 不同K-ras基因型对多西他赛的细胞周期阻滞作用的影响 | 第43-45页 |
| 3.2 不同K-ras基因型对多西他赛的细胞凋亡作用的影响 | 第45-46页 |
| 3.3 siRNA干扰K-ras后对多西他赛药效的影响 | 第46-48页 |
| 3.4 MEK/ERK抑制剂对多西他赛药效的影响 | 第48-49页 |
| 4, 讨论 | 第49-50页 |
| 第四部分：K-ras突变与肿瘤细胞药物摄取的关系 | 第50-58页 |
| 1, 实验材料与仪器 | 第50页 |
| 1.1 实验材料 | 第50页 |
| 1.2 仪器 | 第50页 |
| 2, 实验方法 | 第50-52页 |
| 2.1 HPLC-FLD法测SN-38浓度 | 第50-51页 |
| 2.2 SN-38细胞摄取实验 | 第51-52页 |
| 2.3 HPLC-UV法测多西他赛浓度 | 第52页 |
| 2.4 多西他赛细胞摄取实验 | 第52页 |
| 3, 实验结果 | 第52-56页 |
| 3.1 伊立替康及其活性代谢物SN-38同时检测方法学的建立及考证 | 第52-54页 |
| 3.2 不同K-ras基因型细胞株对SN-38的摄取 | 第54-55页 |
| 3.3 不同K-ras基因型细胞株对多西他赛的摄取 | 第55-56页 |
| 4, 讨论 | 第56-58页 |
| 全文总结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 综述：K-ras基因突变对肿瘤化疗效果的预测作用的研究进展 | 第63-73页 |
| 参考文献 | 第70-73页 |
| 发表或拟发表的文章 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
