| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词 | 第10-16页 |
| 绪论 | 第16-19页 |
| 1 人胚胎干细胞来源的间充质干细胞(HESC-MSCS)构建组织工程肌腱用于肌腱修复研究 | 第19-54页 |
| 1.1 引言 | 第19-21页 |
| 1.2 实验试剂与仪器 | 第21-25页 |
| 1.2.1 材料和试剂 | 第21-23页 |
| 1.2.2 实验仪器 | 第23页 |
| 1.2.3 相关溶液的配置 | 第23-25页 |
| 1.3 实验方法 | 第25-37页 |
| 1.3.1 HESC-MSC的获得和扩增 | 第25-26页 |
| 1.3.2 ALP染色 | 第26页 |
| 1.3.3 软骨诱导 | 第26-27页 |
| 1.3.4 油红染色 | 第27页 |
| 1.3.5 流式细胞术检测 | 第27页 |
| 1.3.6 蚕丝-胶原复合支架的制备 | 第27-28页 |
| 1.3.7 细胞在支架上种植和培养 | 第28页 |
| 1.3.8 体外力学刺激 | 第28页 |
| 1.3.9 细胞标记和检测 | 第28-29页 |
| 1.3.10 动物模型 | 第29页 |
| 1.3.11 组织学检测 | 第29-31页 |
| 1.3.12 肌腱组织学评分标准 | 第31-32页 |
| 1.3.13 胶原含量测定 | 第32-34页 |
| 1.3.14 GAG含量检测 | 第34页 |
| 1.3.15 RNA提取和qRT-PCR | 第34页 |
| 1.3.16 免疫组化 | 第34-35页 |
| 1.3.17 SEM观察 | 第35页 |
| 1.3.18 TEM样本制备及观察 | 第35-36页 |
| 1.3.19 胶原纤维直径测量 | 第36页 |
| 1.3.20 力学测试 | 第36页 |
| 1.3.21 统计学分析 | 第36-37页 |
| 1.4 实验结果 | 第37-51页 |
| 1.4.1 hEM的分离鉴定 | 第37页 |
| 1.4.2 蚕丝胶原支架形态 | 第37-38页 |
| 1.4.3 体外构建组织工程肌腱 | 第38-41页 |
| 1.4.4 异位构建组织工程肌腱 | 第41-44页 |
| 1.4.5 大鼠跟腱原位修复 | 第44-51页 |
| 1.5 讨论 | 第51-54页 |
| 2 肌腱发育分化过程中的阶段特异性基因筛选和功能研究 | 第54-95页 |
| 2.1 引言 | 第54-56页 |
| 2.2 实验试剂与仪器 | 第56-57页 |
| 2.2.1 材料 | 第56-57页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第57页 |
| 2.2.3 试剂配制 | 第57页 |
| 2.2.4 其他试剂仪器 | 第57页 |
| 2.3 实验方法 | 第57-67页 |
| 2.3.1 分离培养肌腱干细胞 | 第57-58页 |
| 2.3.2 结晶紫染色 | 第58页 |
| 2.3.3 细胞增殖检测 | 第58页 |
| 2.3.4 Cell sheet(细胞片)培养 | 第58页 |
| 2.3.5 基因芯片检测 | 第58-59页 |
| 2.3.6 基因过表达构建 | 第59页 |
| 2.3.7 制LB板 | 第59-60页 |
| 2.3.8 转化 | 第60页 |
| 2.3.9 切胶回收 | 第60-61页 |
| 2.3.10 加A | 第61页 |
| 2.3.11 PCR产物清洗 | 第61-62页 |
| 2.3.12 T载体连接 | 第62页 |
| 2.3.13 质粒中抽 | 第62-63页 |
| 2.3.14 质粒小抽 | 第63-64页 |
| 2.3.15 病毒感染细胞 | 第64-65页 |
| 2.3.16 siRNA转染步骤 | 第65-66页 |
| 2.3.17 细胞免疫荧光 | 第66页 |
| 2.3.18 其余方法同第一章 | 第66-67页 |
| 2.4 实验结果 | 第67-92页 |
| 2.4.1 出生后大鼠跟腱发育过程 | 第67-70页 |
| 2.4.2 不同发育时间点TSPCs的分离比较 | 第70-77页 |
| 2.4.3 组织样本基因芯片筛选肌腱早期标志基因 | 第77-81页 |
| 2.4.4 Fos与早期肌腱表型维持的相关性 | 第81-83页 |
| 2.4.5 TSPCs-7d过表达fos基因 | 第83-89页 |
| 2.4.6 TSPCs-7d敲除fos基因 | 第89-92页 |
| 2.5 讨论 | 第92-95页 |
| 3 FOS促进HESC-MSCS向肌腱系早期阶段分化研究 | 第95-103页 |
| 3.1 引言 | 第95-97页 |
| 3.2 实验试剂与仪器 | 第97页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第97页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第97页 |
| 3.2.3 相关溶液的配制 | 第97页 |
| 3.3 实验方法 | 第97-98页 |
| 3.4 实验结果 | 第98-101页 |
| 3.4.1 过表达载体构建 | 第98页 |
| 3.4.2 基因表达 | 第98页 |
| 3.4.3 细胞增殖 | 第98-99页 |
| 3.4.4 克隆形成能力 | 第99页 |
| 3.4.5 多向分化能力 | 第99-100页 |
| 3.4.6 体外分化模型评估 | 第100-101页 |
| 3.5 讨论 | 第101-103页 |
| 4 总结 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-110页 |
