| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-24页 |
| ·低温冷冻保存技术 | 第11-12页 |
| ·低温保存方法 | 第12-16页 |
| ·慢速冷冻法 | 第12页 |
| ·慢速冷冻的损伤机理 | 第12-14页 |
| ·玻璃化冻存法 | 第14-15页 |
| ·玻璃化冷冻法的冻存机理 | 第15-16页 |
| ·影响细胞/组织玻璃化冻存的几个主要因素 | 第16-20页 |
| ·CPA的选择 | 第16-19页 |
| ·降温与升温速率 | 第19页 |
| ·冷冻样品的体积 | 第19页 |
| ·冷冻CPA的导入条件与冻后储存温度 | 第19-20页 |
| ·NSCs的玻璃化冻存 | 第20-23页 |
| ·NSCs概述 | 第20-21页 |
| ·NSCs玻璃化冷冻的意义 | 第21-22页 |
| ·NSCs玻璃化冷冻方法 | 第22页 |
| ·NSCs玻璃化冻存存在的问题 | 第22-23页 |
| ·NSCs渗透特性的测定 | 第23页 |
| ·本文工作思路及主要内容 | 第23-24页 |
| 2 NSCs的体外培养 | 第24-38页 |
| ·实验材料 | 第24-29页 |
| ·细胞来源 | 第24页 |
| ·实验试剂 | 第24-26页 |
| ·实验设备 | 第26页 |
| ·试剂的配制方法 | 第26-29页 |
| ·实验方法 | 第29-32页 |
| ·NSCs的获得及原代培养 | 第29-30页 |
| ·NSCs的传代和继代培养 | 第30页 |
| ·NSCs生长曲线的绘制 | 第30-31页 |
| ·NSCs免疫荧光组织化学 | 第31-32页 |
| ·实验结果与讨论 | 第32-36页 |
| ·NSCs原代和继代培养 | 第32-35页 |
| ·NSCs的生长曲线 | 第35页 |
| ·NSCs免疫荧光组织化学 | 第35-36页 |
| ·小结 | 第36-38页 |
| 3 NSCs玻璃化冷冻及其生化检测的研究 | 第38-56页 |
| ·概述 | 第38页 |
| ·实验材料 | 第38-40页 |
| ·实验试剂 | 第38-39页 |
| ·实验设备 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-44页 |
| ·CPA的配置 | 第40页 |
| ·CPA一步导入单细胞悬液的体积变化 | 第40-41页 |
| ·CPA一步导入单细胞悬液的活率检测 | 第41页 |
| ·细胞的玻璃化冻存 | 第41-42页 |
| ·冻存细胞的复苏及洗脱 | 第42页 |
| ·细胞活率及生长活性的测定 | 第42页 |
| ·冻存细胞染色鉴定和生长状态观察 | 第42-43页 |
| ·冻存细胞AV/PI凋亡检测 | 第43页 |
| ·冻存细胞分化率检测 | 第43页 |
| ·添加蛋黄的CPA玻璃化冻存 | 第43-44页 |
| ·实验结果与讨论 | 第44-54页 |
| ·CPA一步导入过程细胞的体积变化 | 第44-45页 |
| ·CPA一步导入单细胞悬液的活率检测 | 第45-46页 |
| ·分步导入及玻璃化冻存细胞的活率及生长活性测定 | 第46-48页 |
| ·冻后细胞染色鉴定和生长状态观察 | 第48-50页 |
| ·冻存细胞AV/PI凋亡检测 | 第50-52页 |
| ·冻存细胞分化检测 | 第52-53页 |
| ·添加蛋黄的CPA玻璃化冻存 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第54-56页 |
| 4 NSCs水的细胞膜渗透系数的确定以及神经球长期保存的研究 | 第56-66页 |
| ·概述 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·实验试剂 | 第56-57页 |
| ·实验设备 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-59页 |
| ·CPA渗透压标准曲线的测定 | 第57页 |
| ·NSCs渗透不变体积(V_b)的确定 | 第57-58页 |
| ·水的细胞膜渗透系数(L_p)的确定 | 第58页 |
| ·神经球长期保存的研究 | 第58-59页 |
| ·实验结果与讨论 | 第59-65页 |
| ·CPA渗透压标准曲线 | 第59-60页 |
| ·NSCs渗透不变体积(V_b)的确定 | 第60-61页 |
| ·水的细胞膜渗透系数(L_p)的确定 | 第61-63页 |
| ·神经球长期保存的研究 | 第63-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 附录A 细胞渗透系数汇总 | 第72-73页 |
| 附录B 英文缩略语 | 第73-74页 |
| 附录C 计算L_p需要用到的主要数据 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |