| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 中英文缩写字母表 | 第13-15页 |
| 绪论 | 第15-26页 |
| 第一章 TRIM59在人胃癌组织、癌细胞系中的表达情况与患者临床症状及预后信息的相关性研究 | 第26-48页 |
| 1.1 引言 | 第26-27页 |
| 1.2 材料 | 第27-33页 |
| 1.2.1 仪器材料 | 第27-28页 |
| 1.2.2 试剂材料 | 第28-30页 |
| 1.2.3 胃癌细胞系 | 第30页 |
| 1.2.4 溶液配制 | 第30-33页 |
| 1.3 实验方法 | 第33-40页 |
| 1.3.1 细胞培养 | 第33-34页 |
| 1.3.2 蛋白免疫印迹染色 | 第34-36页 |
| 1.3.3 RNA抽提 | 第36页 |
| 1.3.4 实时荧光定量PCR | 第36-38页 |
| 1.3.5 免疫组织化学染色 | 第38-40页 |
| 1.3.6 数据统计方法 | 第40页 |
| 1.4 结果 | 第40-46页 |
| 1.4.1 Oncomine数据库分析TRIM59在胃癌中的表达情况 | 第40-41页 |
| 1.4.2 临床样本分析TRIM59在胃癌组织与正常组织的表达情况 | 第41-44页 |
| 1.4.3 TRIM59表达水平与病人临床特征的相关性分析 | 第44-45页 |
| 1.4.4 TRIM59在胃癌细胞系中的表达水平 | 第45-46页 |
| 1.5 讨论 | 第46-47页 |
| 1.6 本章小结 | 第47-48页 |
| 第二章 TRIM59促进胃癌的增殖侵袭的作用及机制研究 | 第48-87页 |
| 2.1 引言 | 第48-49页 |
| 2.2 材料 | 第49-53页 |
| 2.2.1 仪器材料 | 第49页 |
| 2.2.2 试剂材料 | 第49-50页 |
| 2.2.3 生物材料 | 第50-52页 |
| 2.2.4 溶液配制 | 第52-53页 |
| 2.3 实验方法 | 第53-63页 |
| 2.3.1 质粒抽提 | 第53-54页 |
| 2.3.2 病毒包装 | 第54-55页 |
| 2.3.3 病毒转染 | 第55-56页 |
| 2.3.4 细胞增殖 | 第56页 |
| 2.3.5 Soft-agar克隆形成 | 第56-57页 |
| 2.3.6 细胞迁移 | 第57-58页 |
| 2.3.7 荷瘤小鼠模型 | 第58-59页 |
| 2.3.8 冰冻切片 | 第59页 |
| 2.3.9 免疫荧光染色 | 第59-60页 |
| 2.3.10 蛋白免疫印迹 | 第60页 |
| 2.3.11 实时荧光定量PCR | 第60-61页 |
| 2.3.12 质粒转染 | 第61页 |
| 2.3.13 检测luciferase报告质粒活性 | 第61-62页 |
| 2.3.14 细胞凋亡检测 | 第62页 |
| 2.3.15 临床样本基因组p53外显子DNA测序 | 第62-63页 |
| 2.4 实验结果 | 第63-84页 |
| 2.4.1 建立体内、体外实验所需工具细胞系 | 第63-65页 |
| 2.4.2 干预TRIM59在细胞系中的表达水平对细胞增殖的影响 | 第65-67页 |
| 2.4.3 干预TRIM59在细胞系中的表达水平对细胞克隆形成的影响 | 第67-69页 |
| 2.4.4 干预TRIM59在细胞系中的表达水平对细胞迁移能力的影响 | 第69-70页 |
| 2.4.5 干预TRIM59在细胞系中的表达水平对肿瘤细胞抗凋亡能力的影响 | 第70-71页 |
| 2.4.6 干扰TRIM59影响对肿瘤相关信号通路中关键组成分子的表达 | 第71-72页 |
| 2.4.7 干预TRIM59在细胞系中的表达水平对细胞系体内成瘤能力的影响 | 第72-74页 |
| 2.4.8 干扰TRIM59肿瘤细胞在体内的增殖减慢而对血管形成没有影响 | 第74-77页 |
| 2.4.9 干扰TRIM59肿瘤细胞在体内成瘤过程中的抗凋亡能力减弱 | 第77-78页 |
| 2.4.10 干扰TRIM59激活p53及其下游通路 | 第78-80页 |
| 2.4.11 干扰TRIM59激活p53作为转录因子的转录活性 | 第80-82页 |
| 2.4.12 TRIM59在临床组织水平和细胞水平影响野生型p53蛋白表达及转录活性 | 第82-84页 |
| 2.5 讨论 | 第84-86页 |
| 2.6 本章小结 | 第86-87页 |
| 第三章 TRIM59通过调控p53蛋白稳定性影响肿瘤发生发展的机制研究 | 第87-110页 |
| 3.1 引言 | 第87-88页 |
| 3.2 材料 | 第88-89页 |
| 3.2.1 仪器材料 | 第88页 |
| 3.2.2 试剂材料 | 第88页 |
| 3.2.3 溶液配制 | 第88-89页 |
| 3.3 实验方法 | 第89-95页 |
| 3.3.1 RT-PCR | 第89-90页 |
| 3.3.2 核质分离 | 第90页 |
| 3.3.3 蛋白免疫沉淀 | 第90-91页 |
| 3.3.4 测定蛋白降解速率 | 第91-92页 |
| 3.3.5 TRIM59蛋白截断体的构建 | 第92-95页 |
| 3.4 结果 | 第95-107页 |
| 3.4.1 过表达TRIM59抑制p53的蛋白表达 | 第95-96页 |
| 3.4.2 过表达TRIM59使p53的蛋白降解速率加快 | 第96-97页 |
| 3.4.3 过表达TRIM59加速p53由蛋白酶体途径介导的蛋白降解 | 第97-99页 |
| 3.4.4 TRIM59与p53蛋白在细胞内的定位模式 | 第99-101页 |
| 3.4.5 TRIM59过表达促进p53蛋白的泛素化修饰 | 第101-102页 |
| 3.4.6 阻断p53通路，减弱TRIM59对肿瘤细胞恶性程度的影响 | 第102-104页 |
| 3.4.7 TRIM59基因RING结构域的功能验证 | 第104-105页 |
| 3.4.8 MDM2参与TRIM59调控的p53的泛素化降解过程 | 第105-107页 |
| 3.5 讨论 | 第107-108页 |
| 3.6 本章小结 | 第108-110页 |
| 全文总结 | 第110-111页 |
| 研究展望 | 第111-112页 |
| 附录 | 第112-117页 |
| 参考文献 | 第117-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及会议摘要 | 第128页 |
