| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-23页 |
| 1.1 抗菌肽 | 第11-17页 |
| 1.1.1 抗菌肽的分类 | 第11-13页 |
| 1.1.2 抗菌肽的理化性质 | 第13页 |
| 1.1.3 抗菌肽的作用机制 | 第13-14页 |
| 1.1.4 抗菌肽的生物活性 | 第14-16页 |
| 1.1.5 抗菌肽的应用前景 | 第16-17页 |
| 1.2 抗菌肽的表达研究进展 | 第17-20页 |
| 1.2.1 抗菌肽的来源 | 第17页 |
| 1.2.2 抗菌肽的原核表达体系 | 第17-19页 |
| 1.2.3 抗菌肽的真核表达体系 | 第19-20页 |
| 1.3 存在的问题 | 第20-21页 |
| 1.4 本文的研究内容和意义 | 第21-23页 |
| 1.4.1 本文的研究内容 | 第21页 |
| 1.4.2 本文的研究意义 | 第21-23页 |
| 第二章 阳离子抗菌肽Pleurocidin在大肠杆菌中的高效分泌表达 | 第23-55页 |
| 引论 | 第23页 |
| 2.1 材料 | 第23-28页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 菌株及载体 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要溶液剂试剂配制 | 第25-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-40页 |
| 2.2.1 搭桥引物PCR合成Pleurocidin基因片段 | 第28-30页 |
| 2.2.2 Pluerocidin在大肠杆菌中的诱导表达 | 第30-35页 |
| 2.2.3 融合蛋白Cherry-Pleurocidin在大肠杆菌中的诱导表达 | 第35-40页 |
| 2.3 结果 | 第40-53页 |
| 2.3.1 搭桥引物PCR扩增结果 | 第40-41页 |
| 2.3.2 含双酶切位点的Pleurocidin基因片段PCR结果 | 第41-42页 |
| 2.3.3 含单酶切位点的Pleurocidin和Cherry基因片段的PCR结果 | 第42-43页 |
| 2.3.4 融合基因Cherry-Pleurocidin的PCR扩增结果 | 第43页 |
| 2.3.5 筛选阳性克隆 | 第43-44页 |
| 2.3.6 工程菌的诱导表达 | 第44-45页 |
| 2.3.7 乳糖诱导组和乳糖+甘氨酸诱导组SDS-PAGE比较 | 第45-46页 |
| 2.3.8 Lowry法测蛋白浓度 | 第46-47页 |
| 2.3.9 乳糖诱导组和乳糖+甘氨酸诱导组的配对数据t检验 | 第47-48页 |
| 2.3.10 融合蛋白酸特异性切割 | 第48-49页 |
| 2.3.11 Pleurocidin的纯化结果 | 第49-50页 |
| 2.3.12 Pleurocidin的抑菌活性鉴定 | 第50-51页 |
| 2.3.13 Pleurocidin的质谱分析 | 第51-53页 |
| 2.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第三章 pYES2质粒启动子改造及其在酿酒酵母异源基因表达中的应用 | 第55-69页 |
| 引论 | 第55-56页 |
| 3.1 材料 | 第56-57页 |
| 3.1.1 主要仪器设备 | 第56页 |
| 3.1.2 菌株和载体 | 第56页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第56页 |
| 3.1.4 常用试剂配制方法 | 第56-57页 |
| 3.2 方法 | 第57-61页 |
| 3.2.1 引物的设计与合成 | 第57页 |
| 3.2.2 TPI启动子和质粒pYES2-α-LfcinB的PCR反应 | 第57页 |
| 3.2.3 TPI启动子和质粒pYES2-α-LfcinB的磷酸化与平末端连接 | 第57-58页 |
| 3.2.4 连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第58页 |
| 3.2.5 筛选阳性克隆 | 第58页 |
| 3.2.6 提取重组质粒pYES2-TPI-LfcinB | 第58-59页 |
| 3.2.7 酿酒酵母INVScl感受态细胞的制备 | 第59页 |
| 3.2.8 重组质粒pYES2-TPI-LfcinB转化酿酒酵母INVSc1 | 第59-60页 |
| 3.2.9 筛选酿酒酵母阳性克隆 | 第60页 |
| 3.2.10 酿酒酵母pYES2-TPI-LfcinB的培养 | 第60页 |
| 3.2.11 酿酒酵母pYES2-TPI-LfcinB培养上清抑菌活性的检测 | 第60-61页 |
| 3.3 结果 | 第61-67页 |
| 3.3.1 TPI启动子的PCR扩增结果 | 第61-62页 |
| 3.3.2 pYES2质粒的PCR结果 | 第62-63页 |
| 3.3.3 pYES2-TPI-LfcinB菌株的OD600检测结果 | 第63-64页 |
| 3.3.4 培养时间对Lfcin B的表达活性的影响 | 第64-65页 |
| 3.3.5 不同体积培养上清SDS-PAGE检测结果 | 第65-66页 |
| 3.3.6 LfcinB的抑菌活性研究 | 第66-67页 |
| 3.4 讨论 | 第67-69页 |
| 第四章 总结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第78页 |
