| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 主要缩略词 | 第12-13页 |
| 1 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 问题的提出及研究意义 | 第13-15页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第15-21页 |
| 1.2.1 IGF1的功能 | 第15-16页 |
| 1.2.2 IGF1的基因结构和可变剪接 | 第16-17页 |
| 1.2.3 IGF1的加工、分泌和糖基化过程 | 第17-18页 |
| 1.2.4 IGF1剪接变异体在力敏感细胞中的表达 | 第18-20页 |
| 1.2.5 合成的Ec和MGF E肽的生物活性 | 第20-21页 |
| 1.3 本研究的目的和研究内容 | 第21-25页 |
| 1.3.1 本研究的目的 | 第21-22页 |
| 1.3.2 本研究的主要内容 | 第22-23页 |
| 1.3.3 本文的创新点 | 第23-25页 |
| 2 IGF1Ec相关载体构建、表达和纯化 | 第25-55页 |
| 2.1 引言 | 第25-27页 |
| 2.2 主要材料与仪器 | 第27-29页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.2.2 限制性内切酶 | 第27页 |
| 2.2.3 其他试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第28页 |
| 2.2.5 基因扩增所用到的引物 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-40页 |
| 2.3.1 PCR扩增反应体系和反应条件 | 第29-30页 |
| 2.3.2 琼脂糖凝胶回收 | 第30-31页 |
| 2.3.3 酶切、连接和转化反应 | 第31-33页 |
| 2.3.4 菌落PCR，质粒PCR和测序 | 第33-35页 |
| 2.3.5 感受态细菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)的制备 | 第35页 |
| 2.3.6 GST融合蛋白诱导表达及纯化 | 第35-36页 |
| 2.3.7 SDS-PAGE | 第36-38页 |
| 2.3.8 蛋白质免疫印迹（Wstern Bot） | 第38-40页 |
| 2.3.9 MALDI-TOF/TOF质谱分析法 | 第40页 |
| 2.4 实验结果 | 第40-51页 |
| 2.4.1 pGEX-4T-1/IGF1Ec的构建和诱导表达 | 第40-42页 |
| 2.4.2 pGEX-4T-1/IGF1Ec(Mut54-56)和pGEX-4T-1/IGF1Ec(Mut-total)的构建和诱导表达 | 第42-47页 |
| 2.4.3 IGF1Ec蛋白在Rosetta（DE3）中诱导表达条件的优化 | 第47-48页 |
| 2.4.4 IGF1Ec蛋白质的纯化 | 第48-50页 |
| 2.4.5 IGF1Ec在Rosetta（DE3）和BL21（DE3）中诱导表达效果比较 | 第50-51页 |
| 2.5 结果讨论 | 第51-55页 |
| 3 IGF1Ec生物学活性检测 | 第55-65页 |
| 3.1 引言 | 第55页 |
| 3.2 主要材料与仪器 | 第55-56页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第55页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第55页 |
| 3.2.3 实验器材及设备 | 第55-56页 |
| 3.2.4 RT-PCR所用到的引物 | 第56页 |
| 3.3 实验方法 | 第56-59页 |
| 3.3.1 原代成骨细胞的分离纯化 | 第56-57页 |
| 3.3.2 CCK-8 检测细胞活性增殖 | 第57页 |
| 3.3.3 RT-PCR检测基因表达 | 第57-59页 |
| 3.3.4 ALP活性检测 | 第59页 |
| 3.3.5 划痕实验 | 第59页 |
| 3.3.6 数据处理分析 | 第59页 |
| 3.4 实验结果 | 第59-64页 |
| 3.4.1 原代和纯化传代后成骨细胞形态学观察 | 第59-60页 |
| 3.4.2 不同浓度的IGF1Ec对成骨细胞增殖的影响 | 第60-61页 |
| 3.4.3 IGF1Ec对成骨细胞分化的影响 | 第61-63页 |
| 3.4.4 IGF1Ec对成骨细胞迁移的影响 | 第63-64页 |
| 3.5 结果讨论 | 第64-65页 |
| 4 IGF1Ec、IGF1和MGF E肽对C2C12细胞增殖、分化和迁移的影响 | 第65-79页 |
| 4.1 引言 | 第65-67页 |
| 4.2 主要材料与仪器 | 第67页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第67页 |
| 4.2.2 实验器材及设备 | 第67页 |
| 4.2.3 试剂配置 | 第67页 |
| 4.3 实验方法 | 第67-70页 |
| 4.3.1 C2C12细胞的培养 | 第67-68页 |
| 4.3.2 CCK-8 检测细胞活性增殖 | 第68页 |
| 4.3.3 免疫荧光（Immunofluorescence，IF） 检测MyHC | 第68页 |
| 4.3.4 蛋白质样品的提取 | 第68页 |
| 4.3.5 Bicinchonininc acid（BCA）法对蛋白质含量的测定 | 第68-69页 |
| 4.3.6 Western Blot检测Myogenin的表达 | 第69页 |
| 4.3.7 Transwell plate assay | 第69-70页 |
| 4.3.8 数据处理分析 | 第70页 |
| 4.4 实验结果 | 第70-75页 |
| 4.4.1 不同浓度的IGF1Ec、IGF1和MGF E肽对C2C12细胞增殖的影响 | 第70-72页 |
| 4.4.2 IGF1Ec、IGF1和MGF E肽对C2C12细胞分化的影响 | 第72-73页 |
| 4.4.3 IGF1Ec、IGF1和MGF E肽对C2C12细胞迁移的影响 | 第73-74页 |
| 4.4.4 IGF1R在IGF1Ec促增殖和迁移过程中的作用 | 第74-75页 |
| 4.5 结果讨论 | 第75-79页 |
| 5 重组蛋白IGF1-24对C2C12细胞增殖、分化和迁移的影响 | 第79-89页 |
| 5.1 引言 | 第79页 |
| 5.2 主要材料与仪器 | 第79-80页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第79-80页 |
| 5.2.2 实验器材及设备 | 第80页 |
| 5.2.3 基因扩增所用到的引物 | 第80页 |
| 5.3 实验方法 | 第80页 |
| 5.3.1 pGEX-4T-1/IGF1-24载体构建、表达和纯化 | 第80页 |
| 5.3.2 C2C12细胞的培养 | 第80页 |
| 5.3.3 CCK-8 检测细胞活性增殖 | 第80页 |
| 5.3.4 免疫荧光（Immunofluorescence，IF）检测MyHC | 第80页 |
| 5.3.5 Western Blot检测Myogenin的表达 | 第80页 |
| 5.3.6 Transwell plate assay | 第80页 |
| 5.4 实验结果 | 第80-86页 |
| 5.4.1 pGEX-4T-1/IGF1-24载体构建、表达和纯化 | 第80-82页 |
| 5.4.2 IGF1-24具有同IGF1Ec相似的促增殖作用 | 第82-83页 |
| 5.4.3 IGF1-24具有同IGF1Ec相似的促分化作用 | 第83-85页 |
| 5.4.4 IGF1-24具有同IGF1Ec相似的促迁移作用 | 第85页 |
| 5.4.5 IGF1-24能激活或部分激活IGF1R | 第85-86页 |
| 5.5 结果讨论 | 第86-89页 |
| 6 IGF1Ec在胞内和胞外存在形式 | 第89-95页 |
| 6.1 引言 | 第89页 |
| 6.2 主要材料与仪器 | 第89-90页 |
| 6.2.1 菌株和质粒 | 第89页 |
| 6.2.2 限制性内切酶 | 第89-90页 |
| 6.2.3 实验试剂 | 第90页 |
| 6.2.4 实验仪器 | 第90页 |
| 6.2.5 基因扩增所用到的引物 | 第90页 |
| 6.3 实验方法 | 第90-91页 |
| 6.3.1 pcDNA3.1-IGF1Ec的构建 | 第90页 |
| 6.3.2 瞬时转染 | 第90-91页 |
| 6.3.3 Western Blot | 第91页 |
| 6.4 实验结果 | 第91-93页 |
| 6.4.1 pcDNA3.1-IGF1Ec的构建 | 第91-92页 |
| 6.4.2 IGF1Ec在细胞内的存在形式 | 第92页 |
| 6.4.3 IGF1Ec在胞外的稳定性 | 第92-93页 |
| 6.5 结果讨论 | 第93-95页 |
| 7 GST-Pulldown偶联LC-MS/MS质谱分析检测与IGF1Ec和MGF E肽相互作用的蛋白 | 第95-105页 |
| 7.1 引言 | 第95-96页 |
| 7.2 主要材料与仪器 | 第96页 |
| 7.2.1 实验材料 | 第96页 |
| 7.2.2 实验仪器 | 第96页 |
| 7.3 实验方法 | 第96-99页 |
| 7.3.1 超声裂解菌体提取GST融合蛋白 | 第96-97页 |
| 7.3.2 超声裂解提取真核细胞蛋白 | 第97页 |
| 7.3.3 GST-Pulldown | 第97页 |
| 7.3.4 LC-MS/MS质谱分析 | 第97-99页 |
| 7.4 实验结果 | 第99-102页 |
| 7.4.1 GST-Pulldown偶联LC-MS/MS质谱分析得到分别与IGF1Ec和MGF E肽相互作用的蛋白 | 第99页 |
| 7.4.2 GOEAST和DAVID分析与IGF1Ec和MGF E肽相互作用蛋白的分布和功能 | 第99-102页 |
| 7.5 结果讨论 | 第102-105页 |
| 8 结论和展望 | 第105-109页 |
| 8.1 主要结果和结论 | 第105-106页 |
| 8.2 未来工作展望 | 第106-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-127页 |
| 附录 | 第127页 |
| A. 作者在攻读博士学位期间发表的论文题目和发表的专利 | 第127页 |
