| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第13-26页 |
| 1.1 宏基因组学的简介 | 第13-14页 |
| 1.2 宏基因组学研究现状 | 第14-17页 |
| 1.2.1 宏基因组学的研究方法 | 第14-15页 |
| 1.2.2 宏基因组学的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3 亚栖热菌噬菌体及裂解酶的简介 | 第17-25页 |
| 1.3.1 亚栖热菌的介绍 | 第17-18页 |
| 1.3.2 噬菌体简介 | 第18-21页 |
| 1.3.3 噬菌体裂解酶的简介 | 第21-22页 |
| 1.3.4 裂解酶中结构域分布 | 第22-24页 |
| 1.3.5 裂解酶的应用 | 第24-25页 |
| 1.4 本论文研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 噬菌体基因组测序分析及裂解酶多样性分析 | 第26-64页 |
| 2.1 噬菌体基因组测序分析 | 第26-31页 |
| 2.1.1 研究材料与软件 | 第26页 |
| 2.1.2 研究方法 | 第26-28页 |
| 2.1.2.1 噬菌体收集 | 第26页 |
| 2.1.2.2 噬菌体基因组的提取 | 第26-27页 |
| 2.1.2.3 噬菌体基因组分析流程 | 第27-28页 |
| 2.1.3 实验结果 | 第28-31页 |
| 2.1.3.1 噬菌体基因组电泳结果: | 第28-29页 |
| 2.1.3.2 噬菌体基因组测序分析结果 | 第29-31页 |
| 2.2 裂解酶多样性分析 | 第31-62页 |
| 2.2.1 裂解酶序列检索方法 | 第31-34页 |
| 2.2.2 裂解酶多样性结果分析 | 第34-44页 |
| 2.2.2.1 噬菌体裂解酶amidase系统发育分析 | 第35-41页 |
| 2.2.2.2 噬菌体裂解酶transglycosylase系统发育分析 | 第41-43页 |
| 2.2.2.3 噬菌体裂解酶glucosaminidase系统发育分析 | 第43-44页 |
| 2.2.3 内肽酶(endopeptidase)多样性分析 | 第44-62页 |
| 2.2.3.1 内肽酶endopeptidase物种多样性分析 | 第44-47页 |
| 2.2.3.2 内肽酶endopeptidase保守结构域多样性分析 | 第47-53页 |
| 2.2.3.3 噬菌体裂解酶endopeptidase系统发育分析 | 第53-62页 |
| 2.3 章节小结 | 第62-64页 |
| 第三章 裂解酶基因mmplysin的生物信息学分析 | 第64-91页 |
| 3.1 mmplysin的生物信息学分析 | 第64-67页 |
| 3.1.1 blast序列比对 | 第64页 |
| 3.1.2 多序列比对分析及系统进化树的绘制 | 第64-67页 |
| 3.1.2.1 mmplysin碱基信息 | 第64-65页 |
| 3.1.2.2 系统进化树构建 | 第65-66页 |
| 3.1.2.3 mmplysin编码的氨基酸保守结构域 | 第66-67页 |
| 3.2 研究材料 | 第67页 |
| 3.2.1 质粒和菌株 | 第67页 |
| 3.2.2 培养基的配制 | 第67页 |
| 3.3 研究方法 | 第67-76页 |
| 3.3.1 TG17宿主菌的培养 | 第67页 |
| 3.3.2 引物的设计与合成 | 第67-68页 |
| 3.3.3 裂解酶基因mmplysin的克隆表达 | 第68-74页 |
| 3.3.3.1 温度梯度PCR裂解酶基因mmplysin | 第68页 |
| 3.3.3.2 裂解酶基因mmplysin PCR产物的胶回收 | 第68-69页 |
| 3.3.3.3 pET28a质粒的提取 | 第69-70页 |
| 3.3.3.4 裂解酶基因与质粒的双酶切 | 第70页 |
| 3.3.3.5 裂解酶基因mmplysin和载体pET28a连接 | 第70页 |
| 3.3.3.6 重组质粒转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第70-71页 |
| 3.3.3.7 双酶切鉴定阳性克隆 | 第71页 |
| 3.3.3.8 重组质粒化学转化至E.coli Rosetta菌株 | 第71页 |
| 3.3.3.9 裂解酶mmplysin重组蛋白的诱导表达 | 第71-72页 |
| 3.3.3.10 裂解酶mmplysin重组蛋白的纯化 | 第72页 |
| 3.3.3.11 裂解酶mmplysin重组蛋白的蛋白含量测定 | 第72-73页 |
| 3.3.3.12 裂解酶mmplysin对酪氨酸水解酶活测定 | 第73-74页 |
| 3.3.4 裂解酶mmplysin酶学性质研究及酶活性探索 | 第74-76页 |
| 3.3.4.1 裂解酶mmplysin酶学性质研究 | 第74-75页 |
| 3.3.4.2 裂解酶mmplysin对其宿主菌TG17及其他菌株的生长影响 | 第75-76页 |
| 3.4 研究结果分析 | 第76-90页 |
| 3.4.1 裂解酶基因mmplysin的克隆结果 | 第76-78页 |
| 3.4.2 裂解酶mmplysin表达结果 | 第78-79页 |
| 3.4.3 裂解酶mmplysin纯化结果分析 | 第79-80页 |
| 3.4.4 裂解酶mmplysin蛋白含量测定 | 第80-81页 |
| 3.4.5 裂解酶mmplysin酶活测定 | 第81-82页 |
| 3.4.6 裂解酶mmplysin的酶学性质研究与探索 | 第82-84页 |
| 3.4.6.1 最适反应温度测定 | 第82-83页 |
| 3.4.6.2 最适pH结果分析 | 第83页 |
| 3.4.6.3 金属离子对酶活影响 | 第83-84页 |
| 3.4.7 裂解酶mmplysin对亚栖热菌TG17生长的影响 | 第84-85页 |
| 3.4.8 mmplysin对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和耐药性肺炎克雷伯菌生长影响 | 第85-90页 |
| 3.5 章节小结 | 第90-91页 |
| 第四章 总结与展望 | 第91-93页 |
| 4.1 总结 | 第91-92页 |
| 4.2 展望 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-100页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第100-101页 |
| 附录B 培养基及药品配制 | 第101-104页 |
| 附录C 主要仪器及试剂 | 第104-105页 |
