| 缩略词表 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 前言 | 第17-24页 |
| 1. 烟曲霉 | 第17-21页 |
| 1.1 烟曲霉繁殖 | 第17-18页 |
| 1.1.1 无性繁殖 | 第17-18页 |
| 1.1.2 有性繁殖 | 第18页 |
| 1.2 烟曲霉感染相关的主要疾病 | 第18-19页 |
| 1.3 烟曲霉毒力因素 | 第19-21页 |
| 1.3.1 耐热性 | 第19页 |
| 1.3.2 细胞壁成分和维持 | 第19-20页 |
| 1.3.3 抵抗免疫应答 | 第20页 |
| 1.3.4 毒素 | 第20-21页 |
| 1.3.5 营养摄取 | 第21页 |
| 1.3.6 代谢调节和应激环境应答 | 第21页 |
| 1.3.7 过敏原 | 第21页 |
| 2. 肌动蛋白骨架调节蛋白在真菌中的作用 | 第21-22页 |
| 3. 丝切蛋白Cofilin | 第22-23页 |
| 4. 本研究主要解决的科学问题 | 第23页 |
| 5. 本研究的重要意义 | 第23-24页 |
| 第一章 Cofilin表达和磷酸化状态改变对烟曲霉生物学性状和毒力的影响研究 | 第24-80页 |
| 第一节 引言 | 第24-25页 |
| 第二节 材料及方法 | 第25-49页 |
| 1. 材料 | 第25-31页 |
| 1.1 菌株 | 第25页 |
| 1.2 细胞系 | 第25页 |
| 1.3 质粒 | 第25页 |
| 1.4 引物 | 第25-27页 |
| 1.5 实验试剂 | 第27页 |
| 1.6 仪器设备 | 第27-28页 |
| 1.7 实验溶液及培养基配制 | 第28-31页 |
| 2. 实验方法 | 第31-49页 |
| 2.1 烟曲霉孢子准备 | 第31页 |
| 2.2 烟曲霉基因组提取 | 第31-32页 |
| 2.3 基因编辑 | 第32-36页 |
| 2.4 烟曲霉形态观察及生长速率测定 | 第36页 |
| 2.5 烟曲霉胞壁多糖标记 | 第36-37页 |
| 2.6 Southern Blot | 第37-41页 |
| 2.7 细胞RNA提取及RT-qPCR检测基因表达水平 | 第41-43页 |
| 2.8 烟曲霉蛋白提取及Western blot | 第43-45页 |
| 2.9 烟曲霉粘附细胞能力测定 | 第45-46页 |
| 2.10 烟曲霉侵染细胞能力测定 | 第46页 |
| 2.11 烟曲霉体内毒力测定 | 第46-48页 |
| 2.12 统计学分析 | 第48-49页 |
| 第三节 实验结果 | 第49-77页 |
| 1. cofilin在染色体上的位置及基因结构 | 第49页 |
| 2. 烟曲霉Cofilin蛋白比对 | 第49-50页 |
| 3. Cofilin蛋白在烟曲霉中的表达及分布 | 第50-51页 |
| 4. Cofilin蛋白表达量改变对烟曲霉生物学性状和毒力的影响 | 第51-71页 |
| 4.1 cofilin条件性敲除株和过表达菌株构建和验证 | 第51-54页 |
| 4.2 cofilin条件性敲除株和过表达株形态及生长情况 | 第54-55页 |
| 4.3 Cofilin蛋白表达改变对烟曲霉胞外刺激应答的影响 | 第55-61页 |
| 4.4 Cofilin蛋白表达改变对烟曲霉毒力的影响 | 第61-68页 |
| 4.5 Cofilin表达改变对烟曲霉胞壁多糖合成和MpkA激活的影响 | 第68-71页 |
| 5. Cofilin蛋白磷酸化状态改变对烟曲霉生物学性状和毒力的影响 | 第71-77页 |
| 5.1 cofilinS5A和cofilinteton/cofilinS5E菌株构建及验证 | 第71-72页 |
| 5.2 cofilinS5A和cofilinteton/cofilinS5E突变株形态及生长情况 | 第72-73页 |
| 5.3 Cofilin蛋白磷酸化状态改变对烟曲霉胞外刺激应答的影响 | 第73-75页 |
| 5.4 cofilinS5A突变株侵染A549细胞能力和在免疫缺陷小鼠中的毒力情况 | 第75-76页 |
| 5.5 cofilinS5A突变株表面多糖成分标记 | 第76-77页 |
| 第四节 讨论 | 第77-80页 |
| 第二章 以新的基因突变策略构建烟曲霉Cofilin突变并解析其功能 | 第80-98页 |
| 第一节 引言 | 第80-82页 |
| 第二节 材料及方法 | 第82-91页 |
| 1. 材料 | 第82-85页 |
| 1.1 菌株 | 第82页 |
| 1.2 细胞系 | 第82页 |
| 1.3 质粒 | 第82页 |
| 1.4 引物 | 第82-83页 |
| 1.5 实验试剂 | 第83页 |
| 1.6 仪器设备 | 第83页 |
| 1.7 实验溶液及培养基配制 | 第83-85页 |
| 2. 实验方法 | 第85-91页 |
| 2.1 烟曲霉孢子准备 | 第85页 |
| 2.2 烟曲霉基因组DNA小提（采用博日试剂盒） | 第85-86页 |
| 2.3 基因编辑 | 第86-89页 |
| 2.4 烟曲霉形态观察及荧光白染色 | 第89页 |
| 2.5 烟曲霉侵染细胞能力测定 | 第89-90页 |
| 2.6 烟曲霉感染氢化可的松免疫缺陷小鼠 | 第90-91页 |
| 第三节 实验结果 | 第91-96页 |
| 1. 基因突变构建新策略 | 第91-93页 |
| 2. cofilin点突变菌株验证和表型分析 | 第93-94页 |
| 3. Cofilin点突变对烟曲霉应激的影响 | 第94-95页 |
| 4. Cofilin点突变对烟曲霉毒力的影响 | 第95-96页 |
| 第四节 讨论 | 第96-98页 |
| 第三章 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-109页 |
| 代表性论著 | 第109-110页 |
| 个人简介 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
