| 缩略语表 | 第5-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 文献回顾 | 第10-19页 |
| 第一部分 构建原核表达载体SA-hirudin-RGD | 第19-32页 |
| 1 实验材料 | 第19-21页 |
| 1.1 菌种 | 第19页 |
| 1.2 载体 | 第19-20页 |
| 1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 1.4 常用试剂、缓冲液及培养基 | 第20-21页 |
| 1.5 主要仪器 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.1 E.coli DH5α 感受态的制备 | 第21-22页 |
| 2.2 目的基因的准备 | 第22-24页 |
| 2.3 载体的准备 | 第24-26页 |
| 2.4 载体与目的基因连接 | 第26页 |
| 2.5 重组质粒鉴定 | 第26-27页 |
| 3 实验结果 | 第27-31页 |
| 3.1 PCR得到SA基因片段 | 第27页 |
| 3.2 质粒pET-44b-hirudin-RGD双酶切 | 第27-28页 |
| 3.3 重组质粒pET-44b-SA-hirudin-RGD酶切鉴定 | 第28-29页 |
| 3.4 重组质粒的测序结果和理论序列的比对结果 | 第29-31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| 第二部分 融合蛋白SA-hirudin-RGD的原核表达以及纯化 | 第32-43页 |
| 1 试验材料 | 第32-35页 |
| 1.1 菌种 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂、缓冲液及培养基 | 第32-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-39页 |
| 2.1 E.coli Rosetta-gami感受态的制备 | 第35页 |
| 2.2 融合蛋白SA-hirudin-RGD的表达 | 第35-36页 |
| 2.3 融合蛋白SA-hirudin-RGD的鉴定 | 第36-38页 |
| 2.4 大量诱导表达融合蛋白SA-hirudin-RGD | 第38-39页 |
| 2.5 纯化融合蛋白SA-hirudin-RGD | 第39页 |
| 3 实验结果 | 第39-42页 |
| 3.1 融合蛋白SA-hirudin-RGD的表达条件摸索 | 第39-40页 |
| 3.2 融合蛋白SA-hirudin-RGD的初步鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3 融合蛋白SA-hirudin-RGD的纯化和鉴定 | 第41-42页 |
| 4. 讨论 | 第42-43页 |
| 第三部分 融合蛋白SA-hirudin-RGD的初步功能验证 | 第43-46页 |
| 1 实验材料 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43页 |
| 2.1 融合蛋白SA-hirudin-RGD抗凝血酶作用分析 | 第43页 |
| 2.2 融合蛋白SA-hirudin-RGD抗血小板聚集作用分析 | 第43页 |
| 3 实验结果 | 第43-45页 |
| 3.1 融合蛋白SA-hirudin-RGD抗凝血酶作用 | 第43-44页 |
| 3.2 融合蛋白SA-hirudin-RGD抗血小板聚集作用 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 小结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 个人简历和研究成果 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
