| 摘要 | 第4-5页 |
| Summary | 第5-6页 |
| 缩略词对照表 | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1.乳腺生物反应器 | 第11-15页 |
| 1.1 乳腺生物反应器的研究发展史 | 第11-12页 |
| 1.2 乳腺生物反应器生产蛋白的特点 | 第12页 |
| 1.3 动物生物乳腺反应器的构建方法 | 第12-14页 |
| 1.4 影响外源基因表达的因素 | 第14页 |
| 1.5 乳腺生物反应器发展中存在的问题 | 第14-15页 |
| 1.6 乳腺生物反应器发展前景 | 第15页 |
| 2.基因编辑 | 第15-21页 |
| 2.1 基因编辑原理 | 第16-17页 |
| 2.2 锌指核酸酶技术 | 第17页 |
| 2.3 转录激活因子样效应物核酸酶 | 第17-18页 |
| 2.4 CRISPR-Cas9 系统 | 第18-20页 |
| 2.5 CRISPR/Cas系统应用与展望 | 第20-21页 |
| 3.β-酪蛋白的研究 | 第21-22页 |
| 4.本研究目的意义及主要内容 | 第22-24页 |
| 第二章 CRISPR/Cas9介导奶山羊胎儿成纤维细胞β-酪蛋白基因敲除 | 第24-43页 |
| 1.材料与方法 | 第25-34页 |
| 1.1 试验材料 | 第25-26页 |
| 1.2 试验方法 | 第26-34页 |
| 2.结果与分析 | 第34-41页 |
| 2.1 PX330-e GFP-sg RNA质粒构建 | 第34-35页 |
| 2.2 最佳转染条件优化 | 第35-37页 |
| 2.3 重组质粒转染奶山羊胎儿成纤维细胞 | 第37-38页 |
| 2.4 奶山羊胎儿成纤维细胞靶基因鉴定 | 第38页 |
| 2.5 奶山羊胎儿成纤维细胞敲除位点DNA测序 | 第38-40页 |
| 2.6 Western Blot检测CSN2蛋白表达情况 | 第40-41页 |
| 3.讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 CRISPR/Ca9介导奶山羊成纤维细胞大片段敲除阳性细胞筛选条件优化 | 第43-54页 |
| 1.材料与方法 | 第44-48页 |
| 1.1 试验材料 | 第44-45页 |
| 1.2 试验方法 | 第45-48页 |
| 2.结果与分析 | 第48-53页 |
| 2.1 sg RNA表达载体构建 | 第48-49页 |
| 2.2 最佳G418 筛选浓度的确定 | 第49页 |
| 2.3 细胞共转染及培养 | 第49-50页 |
| 2.4 奶山羊成纤维突变细胞PCR检测 | 第50-51页 |
| 2.5 荧光定量PCR检测 | 第51-52页 |
| 2.6 免疫荧光检测 | 第52-53页 |
| 3.讨论 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63-64页 |
| 导师简介 | 第64-65页 |
