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过氧化氢与一氧化氮互作调控小麦耐铝性的生理与分子机制

致谢第7-13页
图目录第13-15页
摘要第15-19页
Abstract第19-22页
第1章 文献综述第23-50页
    1.1 植物铝毒机制第24-25页
        1.1.1 植物铝毒的作用位点第24页
        1.1.2 铝胁迫对植物的毒害机制第24-25页
    1.2 植物耐铝机制第25-27页
        1.2.1 外部排斥机制第25-26页
        1.2.2 内部耐受机制第26-27页
    1.3 过氧化氢和一氧化氮在植物适应铝毒等逆境胁迫中的作用机理第27-46页
        1.3.1 过氧化氢(H_2O_2)第27-33页
            1.3.1.1 H_2O_2的产生与清除第28-29页
            1.3.1.2 H_2O_2参与的生物学过程第29-30页
            1.3.1.3 H_2O_2信号对基因表达的调控第30-31页
            1.3.1.4 铝胁迫下植物体内H_2O_2的响应及作用第31-33页
        1.3.2 一氧化氮(NO)第33-41页
            1.3.2.1 NO的合成途径第33-35页
            1.3.2.3 NO与植物逆境胁迫第35-38页
            1.3.2.4 铝胁迫下植物体内NO的变化及来源第38-39页
            1.3.2.5 NO在植物适应铝胁迫的作用机制第39-41页
        1.3.3 H_2O_2和NO在植物逆境响应中的相互作用第41-46页
            1.3.3.1 H_2O_2和NO在气孔运动中的相互作用第41-43页
            1.3.3.2 H_2O_2和NO在生物胁迫中的相互作用第43页
            1.3.3.3 H_2O_2和NO在非生物胁迫中的相互作用第43-44页
            1.3.3.4 H_2O_2和NO在调控基因表达中的相互作用第44-45页
            1.3.3.5 MAPK介导的H_2O_2和NO的信号转导第45-46页
    1.4 问题提出与技术路线第46-50页
第2章 铝对不同小麦基因型根尖活性氧和活性氮代谢的影响第50-65页
    2.1 引言第50-51页
    2.2 材料与方法第51-55页
        2.2.1 植物材料与培养第51页
        2.2.2 相对根伸长第51页
        2.2.3 根系活力的测定第51-52页
        2.2.4 根尖铝含量的测定第52页
        2.2.5 ROS在小麦根系分布情况的显微观察第52页
        2.2.6 Schiff's reagent和Evans blue染色第52-53页
        2.2.7 NO和ONOO-含量的测定第53页
        2.2.8 根系NADPH氧化酶活性测定第53-54页
        2.2.9 抗坏血酸和谷胱甘肽含量的测定第54页
        2.2.10 植物体内酶活性的测定第54-55页
        2.2.11 基因表达分析第55页
    2.3 结果分析第55-62页
        2.3.1 铝胁迫对小麦根系伸长和根系活力的影响第55-56页
        2.3.2 铝胁迫对小麦根尖铝含量的影响第56-57页
        2.3.3 铝胁迫对小麦根尖O_2·~-和H_2O_2积累的影响第57页
        2.3.4 铝胁迫对小麦根尖Schiff's reagent和Evans blue吸收量的影响第57-58页
        2.3.5 铝胁迫对小麦根尖NADPH氧化酶的影响第58-59页
        2.3.6 铝胁迫对小麦尖抗氧化系统的影响第59-60页
        2.3.7 铝胁迫对小麦根尖NO含量的影响第60-61页
        2.3.8 铝胁迫对小麦根系ONOO~-含量的影响第61页
        2.3.9 铝胁迫对小麦根尖GSNOR活性的影响第61-62页
    2.4 讨论第62-64页
    本章小结第64-65页
第3章 铝诱导小麦根系NO的早期猝发及其与耐铝性的关系第65-82页
    3.1 引言第65-66页
    3.2 材料与方法第66-70页
        3.2.1 植物材料与培养第66页
        3.2.2 相对根伸长第66页
        3.2.3 根系胼胝质的测定第66-67页
        3.2.4 根系NO含量的测定第67页
        3.2.5 根系ROS含量的测定第67-68页
        3.2.6 根系组织染色第68页
        3.2.7 根系H_2O_2的亚细胞定位第68页
        3.2.8 根系细胞膜完整性、MDA和蛋白质氧化的测定第68-69页
        3.2.9 硝酸还原酶(NR)和一氧化氮合酶(NOS)的测定第69-70页
        3.2.10 抗氧化酶活性的测定第70页
    3.3 结果分析第70-78页
        3.3.1 铝胁迫下根尖内源NO的猝发第70-71页
        3.3.2 NO供体对根系伸长和胼胝质积累的影响第71-74页
        3.3.3 NO供体对根系ROS积累和氧化损伤程度的影响第74-76页
        3.3.4 铝胁迫下小麦根尖NO的来源第76-77页
        3.3.5 NO对小麦根尖抗氧化酶活性的影响第77-78页
    3.4 讨论第78-81页
    本章小结第81-82页
第4章 铝诱导产生的NO对小麦根尖AsA-GSH循环的影响及其与耐铝性的关系第82-98页
    4.1 引言第82-83页
    4.2 材料与方法第83-87页
        4.2.1 植物材料与培养第83页
        4.2.2 相对根伸长第83页
        4.2.3 组织染色和亚细胞定位第83-84页
        4.2.4 脯氨酸含量的测定第84页
        4.2.5 抗坏血酸和谷胱甘肽含量的测定第84-85页
        4.2.6 根系抗氧化能力的测定第85页
        4.2.7 根系酶活性的测定第85-86页
        4.2.8 总RNA提取和半定量RT-PCR第86-87页
    4.3 结果分析第87-95页
        4.3.1 NO供体对根系伸长及内源NO的影响第87-89页
        4.3.2 NO供体对根系ROS和氧化损伤程度的影响第89-90页
        4.3.3 NO供体对根尖抗氧化能力的影响第90-91页
        4.3.4 NO供体对根尖脯氨酸含量的影响第91-92页
        4.3.5 NO供体对AsA和GSH含量的影响第92-93页
        4.3.6 NO供体对AsA-GSH循环酶活性和基因表达的影响第93-94页
        4.3.7 NO供体对GSH代谢酶活性和基因表达的影响第94-95页
    4.4 讨论第95-97页
    本章小结第97-98页
第5章 铝诱导产生的NO对小麦根细胞壁特性的影响及其与根系伸长的关系第98-111页
    5.1 引言第98-99页
    5.2 材料与方法第99-101页
        5.2.1 植物材料与培养第99页
        5.2.2 相对根伸长和Evans blue染色第99页
        5.2.3 根系铝含量的测定第99页
        5.2.4 苏木精染色第99-100页
        5.2.5 NO含量的测定第100页
        5.2.6 根系有机酸的收集与测定第100页
        5.2.7 细胞壁组分分级提取第100-101页
        5.2.8 果胶甲基化程度的测定第101页
        5.2.9 免疫荧光测定第101页
        5.2.10 果胶甲酯酶的测定第101页
    5.3 结果分析第101-108页
        5.3.1 NO清除剂对小麦根系伸长和Evans blue吸收量的影响第101-102页
        5.3.2 NO清除剂对小麦根尖铝含量的影响第102-103页
        5.3.3 NO清除剂对小麦根系苹果酸分泌的影响第103-104页
        5.3.4 NO清除剂对小麦根尖细胞壁组分的影响第104-106页
        5.3.5 NO清除剂对小麦根尖果胶甲酯化程度的影响第106-107页
        5.3.6 NO清除剂对小麦根尖果胶甲酯酶活性的影响第107-108页
    5.4 讨论第108-110页
    本章小结第110-111页
第6章 H_2O_2与NO互作在缓解小麦铝毒中的作用及其机制第111-125页
    6.1 引言第111-112页
    6.2 材料与方法第112-114页
        6.2.1 植物材料与培养第112-113页
        6.2.2 相对根伸长第113页
        6.2.3 NO含量的测定第113页
        6.2.4 根系Evans Blue吸收量和MDA含量的测定第113页
        6.2.5 根系H_2O_2的亚细胞定位第113页
        6.2.6 硝酸还原酶(NR)和一氧化氮合酶(NOS)的测定第113页
        6.2.7 抗氧化酶活性的测定第113-114页
    6.3 结果分析第114-122页
        6.3.1 不同浓度H_2O_2处理对铝胁迫下根系伸长的影响第114页
        6.3.2 H_2O_2处理对铝胁迫下氧化损伤的影响第114-115页
        6.3.3 铝胁迫下内源H_2O_2含量的变化第115-117页
        6.3.4 H_2O_2对根尖NO含量的影响第117-118页
        6.3.5 H_2O_2诱导产生的NO的来源第118-119页
        6.3.6 H_2O_2与NO在缓解根系伸长中的相互作用第119-120页
        6.3.7 H_2O_2与NO在缓解氧化损伤中的相互作用第120-121页
        6.3.8 H_2O_2与NO对根尖抗氧化酶活性的影响第121-122页
    6.4 讨论第122-124页
    本章小结第124-125页
第7章 MAPK、H_2O_2和NO对铝胁迫下小麦根尖抗氧化系统的调控作用及其相互关系第125-133页
    7.1 引言第125-126页
    7.2 材料与方法第126-127页
        7.2.1 植物材料与培养第126页
        7.2.2 NO含量的测定第126页
        7.2.3 抗氧化酶活性的测定第126-127页
    7.3 结果分析第127-131页
        7.3.1 MAPK抑制剂对根尖抗氧化酶活性的影响第127-128页
        7.3.2 MAPK抑制剂对铝胁迫下H_2O_2诱导的根尖抗氧化酶活性的影响第128页
        7.3.3 MAPK抑制剂对铝胁迫下NO诱导的根尖抗氧化酶活性的影响第128-129页
        7.3.4 MAPK抑制剂对铝胁迫下H_2O_2诱导根尖NO产生的影响第129-130页
        7.3.5 MAPK抑制剂对铝胁迫下H_2O_2诱导的NR活性的影响第130-131页
    7.4 讨论第131-132页
    本章小结第132-133页
第8章 全文总结第133-136页
    8.1 主要研究结论第133-134页
    8.2 主要创新点第134-135页
    8.3 研究展望第135-136页
参考文献第136-154页
攻读博士学位期间主要成果第154页

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