| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第15-25页 |
| 1.1 肉牛肌肉发育的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.1.1 牛肉与人类营养 | 第15页 |
| 1.1.2 骨骼肌发育概述 | 第15-17页 |
| 1.1.3 骨骼肌发育相关的信号通路 | 第17-18页 |
| 1.2 microRNA的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.2.1 microRNA的形成机制 | 第18-19页 |
| 1.2.2 microRNA的作用机理 | 第19-20页 |
| 1.2.3 microRNA对骨骼肌发育的影响 | 第20页 |
| 1.2.4 miR-660 的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3 预测靶基因的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.3.1 ARHGEF12的研究进展 | 第21页 |
| 1.3.2 CDH1的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3.3 ETV1的研究进展 | 第22页 |
| 1.3.4 GNAS的研究进展 | 第22页 |
| 1.3.5 HIF1A的研究进展 | 第22页 |
| 1.3.6 SDC1的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.3.7 TPM4的研究进展 | 第23页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第23-25页 |
| 2 miR-660 在秦川牛不同发育阶段组织表达谱研究 | 第25-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.2 实验仪器及试剂 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-28页 |
| 2.3.1 miR-660 生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 2.3.2 相关引物设计 | 第26页 |
| 2.3.3 组织样总RNA的提取 | 第26页 |
| 2.3.4 组织样总RNA反转录 | 第26-27页 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR检测表达量 | 第27-28页 |
| 2.4 结果与分析 | 第28-29页 |
| 2.4.1 miR-660 生物信息学分析 | 第28页 |
| 2.4.2 miR-660 表达谱结果 | 第28-29页 |
| 2.5 讨论 | 第29-30页 |
| 2.6 小结 | 第30-31页 |
| 3 miR-660 对C2C12细胞增殖的影响 | 第31-37页 |
| 3.1 实验材料 | 第31页 |
| 3.2 实验仪器及试剂 | 第31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-33页 |
| 3.3.1 引物设计 | 第31-32页 |
| 3.3.2 细胞培养及诱导增殖 | 第32页 |
| 3.3.3 细胞转染 | 第32-33页 |
| 3.3.4 细胞总RNA的提取 | 第33页 |
| 3.3.5 荧光定量PCR | 第33页 |
| 3.4 结果与分析 | 第33-35页 |
| 3.4.1 诱导C2C12细胞增殖状态下miR-660 及Ki67的表达趋势 | 第33-34页 |
| 3.4.2 miR-660 促进C2C12增殖 | 第34-35页 |
| 3.5 讨论 | 第35-36页 |
| 3.6 小结 | 第36-37页 |
| 4 miR-660 对C2C12细胞分化的影响 | 第37-47页 |
| 4.1 实验材料 | 第37页 |
| 4.2 实验仪器及试剂 | 第37页 |
| 4.3 实验方法 | 第37-39页 |
| 4.3.1 引物设计 | 第37-38页 |
| 4.3.2 细胞培养及诱导分化 | 第38页 |
| 4.3.3 细胞转染 | 第38页 |
| 4.3.4 细胞总RNA的提取 | 第38页 |
| 4.3.5 荧光定量PCR | 第38-39页 |
| 4.3.6 Western Blot | 第39页 |
| 4.3.7 细胞免疫荧光 | 第39页 |
| 4.4 结果与分析 | 第39-44页 |
| 4.4.1 C2C12细胞分化状态下miR-660 及其分化标志基因的表达趋势 | 第39-41页 |
| 4.4.2 过表达miR-660 抑制C2C12成肌细胞分化 | 第41-43页 |
| 4.4.3 干扰miR-660 促进C2C12成肌细胞分化 | 第43-44页 |
| 4.5 讨论 | 第44-45页 |
| 4.6 小结 | 第45-47页 |
| 5 miR-660 靶基因的预测及验证 | 第47-61页 |
| 5.1 实验材料 | 第47页 |
| 5.2 实验仪器及试剂 | 第47页 |
| 5.3 实验方法 | 第47-53页 |
| 5.3.1 秦川牛全血DNA的提取 | 第47-48页 |
| 5.3.2 靶基因双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第48-51页 |
| 5.3.3 靶基因突变体载体的构建 | 第51-52页 |
| 5.3.4 野生型靶基因和突变型靶基因载体质粒提取 | 第52页 |
| 5.3.5 细胞培养及转染 | 第52-53页 |
| 5.3.6 双荧光素酶报告基因系统检测 | 第53页 |
| 5.3.7 C2C12细胞总RNA的提取 | 第53页 |
| 5.3.8 荧光定量PCR | 第53页 |
| 5.3.9 Western Blot | 第53页 |
| 5.4 结果与分析 | 第53-59页 |
| 5.4.1 生物信息学预测miR-660 的靶基因 | 第53-54页 |
| 5.4.2 miR-660 野生型及突变型靶基因双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第54-56页 |
| 5.4.3 双荧光素酶报告基因检测miR-660 与靶基因的靶向关系 | 第56-57页 |
| 5.4.4 过表达及干扰miR-660 对靶基因的影响 | 第57-59页 |
| 5.5 讨论 | 第59-60页 |
| 5.6 小结 | 第60-61页 |
| 6 结论与创新点 | 第61-63页 |
| 6.1 结论 | 第61页 |
| 6.2 创新点 | 第61-62页 |
| 6.3 下一步研究 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-79页 |
| 附录 | 第79-91页 |
| 附录1 实验仪器及试剂 | 第79-82页 |
| 附录2 组织及细胞总RNA提取 | 第82-83页 |
| 附录3 细胞转染 | 第83页 |
| 附录4 细胞总蛋白的提取 | 第83-84页 |
| 附录5 BCA测定蛋白浓度 | 第84-85页 |
| 附录6 Western Blot | 第85-87页 |
| 附录7 细胞免疫荧光 | 第87-88页 |
| 附录8 全血DNA的提取 | 第88-89页 |
| 附录9 酶连产物转化 | 第89页 |
| 附录10 质粒提取 | 第89-90页 |
| 附录11 双荧光素酶报告基因检测 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 作者简介 | 第93-95页 |
| 学位论文数据集 | 第95页 |
