| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 前言 | 第9-17页 |
| 1.1 真菌的次生代谢产物 | 第9-10页 |
| 1.2 土曲霉合成洛伐他汀的研究进展 | 第10-13页 |
| 1.3 真菌的分解代谢阻遏调节 | 第13-16页 |
| 1.4 研究目的和主要内容 | 第16-17页 |
| 第2章 土曲霉表达载体的建立和验证 | 第17-34页 |
| 2.1 材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 仪器 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-26页 |
| 2.2.1 土曲霉ATCC 20542 基因组DNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.2.2 感受态细胞制备 | 第19-20页 |
| 2.2.3 大肠杆菌的转化 | 第20页 |
| 2.2.4 大肠杆菌JM109质粒提取 | 第20-21页 |
| 2.2.5 土曲霉表达载体的构建 | 第21-24页 |
| 2.2.6 土曲霉Ppdc-DsRed-Tpdc表达盒转化 | 第24-25页 |
| 2.2.7 菌丝裂解释放基因组进行PCR检测 | 第25页 |
| 2.2.8 土曲霉转化子DsRed片段检测及转化子检测 | 第25页 |
| 2.2.9 pUC-ACE-Ds Red 转化子观察 | 第25-26页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第26-32页 |
| 2.3.1 土曲霉表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.3.2 将DsRed连接至表达载体上 | 第27-29页 |
| 2.3.3 表达载体pUC-ACE-DsRed转化土曲霉ATCC 20542 | 第29-31页 |
| 2.3.4 土曲霉pUC19-ACE-DsRed的红色荧光观察 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 2.4.1 土曲霉表达载体pUC-ACE的构建 | 第32页 |
| 2.4.2 土曲霉pUC-ACE-DsRed转化子红色荧光的表达 | 第32-33页 |
| 2.5 小结 | 第33-34页 |
| 第3章 siRNA干扰洛伐他汀表达调控基因creA | 第34-50页 |
| 3.1 材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第34页 |
| 3.1.2 试剂 | 第34-35页 |
| 3.1.3 仪器 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-42页 |
| 3.2.1 creA基因的测定 | 第35-37页 |
| 3.2.2 creA基因干扰片段设计 | 第37-38页 |
| 3.2.3 构建pUC-ACE-siRNA干扰表达载体及检测 | 第38页 |
| 3.2.4 干扰载体pUC-ACE-siRNA转化至土曲霉ATCC 20542 中 | 第38页 |
| 3.2.5 土曲霉ATCC 20542 发酵 | 第38-39页 |
| 3.2.6 检测样品提取 | 第39-40页 |
| 3.2.7 RT-PCR制备cDNA | 第40页 |
| 3.2.8 土曲霉creA基因的表达量测定 | 第40-42页 |
| 3.2.9 高效液相色谱测定洛伐他汀含量 | 第42页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第42-47页 |
| 3.3.1 creA基因的测定 | 第42-43页 |
| 3.3.2 干扰载体pUC-ACE-siRNA的构建 | 第43-45页 |
| 3.3.3 干扰载体pUC-ACE-siCRE转化土曲霉ATCC 20542 | 第45页 |
| 3.3.4 实时荧光定量PCR检验creA基因表达量的变化 | 第45-46页 |
| 3.3.5 高效液相色谱测定洛伐他汀含量 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-49页 |
| 3.5 小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 附录 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
