| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 前言 | 第11-29页 |
| 1.1 镁元素的细胞生理功能 | 第11-13页 |
| 1.1.1 镁离子与离子通道 | 第11-12页 |
| 1.1.2 镁离子与线粒体 | 第12-13页 |
| 1.1.3 镁离子与内质网 | 第13页 |
| 1.1.4 镁离子与细胞周期 | 第13页 |
| 1.2 镁离子与疾病 | 第13-15页 |
| 1.2.1 糖尿病 | 第14页 |
| 1.2.2 肾结石病 | 第14页 |
| 1.2.3 骨病 | 第14-15页 |
| 1.2.4 心血管病 | 第15页 |
| 1.3 镁离子转运机制 | 第15-25页 |
| 1.3.1 原核细胞的镁离子转运体 | 第15-17页 |
| 1.3.2 植物细胞的镁离子转运体 | 第17-20页 |
| 1.3.3 动物细胞的镁离子转运体 | 第20-22页 |
| 1.3.4 酵母的镁离子转运体 | 第22-25页 |
| 1.4 果蝇在金属元素代谢研究中的应用 | 第25-27页 |
| 1.4.1 果蝇微量金属元素代谢研究 | 第25-27页 |
| 1.4.2 果蝇镁元素代谢研究 | 第27页 |
| 1.5 论文的研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 1.6 论文各部分主要内容 | 第28-29页 |
| 第2章 果蝇线粒体镁离子转出蛋白的遗传筛选 | 第29-35页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第29-30页 |
| 2.1.1 材料 | 第29页 |
| 2.1.2 果蝇序列同源性筛选 | 第29页 |
| 2.1.3 候选基因过表达载体构建 | 第29页 |
| 2.1.4 酵母细胞转化 | 第29-30页 |
| 2.1.5 点点检测酵母菌株生长状况 | 第30页 |
| 2.2 实验结果 | 第30-32页 |
| 2.2.1 果蝇编码酵母Mme1同源蛋白的候选基因 | 第30-31页 |
| 2.2.2 CG3476能使mme1?mrs2?双突变菌株恢复生长缺陷表型 | 第31-32页 |
| 2.3 讨论 | 第32-35页 |
| 第3章 dMme1蛋白定位和镁转运功能验证 | 第35-47页 |
| 3.1 实验材料和方法 | 第35-40页 |
| 3.1.1 用于转化和转染的质粒构建 | 第35-36页 |
| 3.1.2 哺乳动物细胞瞬时转染 | 第36页 |
| 3.1.3 激光扫描共聚焦显微镜的观察 | 第36页 |
| 3.1.4 酵母细胞转化 | 第36页 |
| 3.1.5 点点检测酵母菌株生长状况 | 第36页 |
| 3.1.6 酵母总RNA提取 | 第36-37页 |
| 3.1.7 半定量RT-PCR | 第37-38页 |
| 3.1.8 酵母线粒体提取 | 第38-39页 |
| 3.1.9 酵母线粒体金属离子含量检测 | 第39页 |
| 3.1.10 统计学分析 | 第39-40页 |
| 3.2 实验结果 | 第40-45页 |
| 3.2.1 CG3476定位于细胞线粒体膜上 | 第40页 |
| 3.2.2 CG3476过表达导致野生型酵母出现生长缺陷和RNA剪切缺陷 | 第40-44页 |
| 3.2.3 CG3476过表达降低野生型酵母细胞线粒体镁离子含量 | 第44-45页 |
| 3.3 讨论 | 第45-47页 |
| 第4章 利用原核表达系统验证dMme1镁离子转运功能 | 第47-56页 |
| 4.1 实验材料和方法 | 第47-49页 |
| 4.1.1 质粒构建 | 第47页 |
| 4.1.2 点点检测大肠杆菌生长状况 | 第47-48页 |
| 4.1.3 蛋白跨膜区和拓扑结构预测 | 第48页 |
| 4.1.4 大肠杆菌细胞金属离子含量检测 | 第48页 |
| 4.1.5 免疫荧光染色 | 第48-49页 |
| 4.1.6 激光扫描共聚焦显微镜的观察 | 第49页 |
| 4.1.7 统计学分析 | 第49页 |
| 4.2 实验结果 | 第49-54页 |
| 4.2.1 异源性表达的dMme1位于大肠杆菌周质空间部分 | 第49-51页 |
| 4.2.2 异源性表达dMme1降低大肠杆菌细胞内镁离子含量 | 第51-52页 |
| 4.2.3 异源性表达dMme1增强大肠杆菌对高浓度镁的耐受性 | 第52-54页 |
| 4.3 讨论 | 第54-56页 |
| 第5章 dMme1将镁离子转运出果蝇线粒体 | 第56-71页 |
| 5.1 实验材料和方法 | 第56-61页 |
| 5.1.1 果蝇的UAS/Gal4系统 | 第56页 |
| 5.1.2 果蝇品系 | 第56-58页 |
| 5.1.3 果蝇培养条件 | 第58-60页 |
| 5.1.4 果蝇总RNA提取 | 第60页 |
| 5.1.5 半定量RT-PCR | 第60页 |
| 5.1.6 果蝇线粒体提取 | 第60-61页 |
| 5.1.7 果蝇线粒体金属离子含量检测 | 第61页 |
| 5.1.8 统计学分析 | 第61页 |
| 5.2 实验结果 | 第61-69页 |
| 5.2.1 dMME1的RNAi导致果蝇线粒体镁离子含量升高 | 第61-63页 |
| 5.2.2 dMME1的RNAi不影响线粒体钙离子水平 | 第63-64页 |
| 5.2.3 dMME1的过表达导致果蝇线粒体镁离子含量降低 | 第64-65页 |
| 5.2.4 dMME1的过表达不影响线粒体钙离子水平 | 第65-66页 |
| 5.2.5 dMME1表达水平受到外界镁离子含量变化的影响 | 第66-68页 |
| 5.2.6 dMme1参与维持果蝇线粒体镁离子水平相对稳定 | 第68-69页 |
| 5.3 讨论 | 第69-71页 |
| 第6章 dMme1通过镁离子转运影响果蝇寿命 | 第71-82页 |
| 6.1 实验材料和方法 | 第71-73页 |
| 6.1.1 果蝇品系和培养条件 | 第71页 |
| 6.1.2 果蝇寿命检测 | 第71页 |
| 6.1.3 果蝇线粒体提取 | 第71页 |
| 6.1.4 果蝇线粒体金属离子含量检测 | 第71-72页 |
| 6.1.5 ATP水平检测 | 第72页 |
| 6.1.6 果蝇相对羽化率检测 | 第72页 |
| 6.1.7 统计学分析 | 第72-73页 |
| 6.2 实验结果 | 第73-79页 |
| 6.2.1 RNA干扰dMME1导致果蝇寿命缩短 | 第73-74页 |
| 6.2.2 降低食物镁离子含量能挽救dMME1-RNAi果蝇的寿命以及线粒体镁离子水平 | 第74-76页 |
| 6.2.3 dMME1的过表达影响果蝇羽化率 | 第76-77页 |
| 6.2.4 dMME1的过表达导致果蝇寿命缩短 | 第77-78页 |
| 6.2.5 在食物中添加镁离子能挽救dMME1-OE果蝇的寿命以及线粒体镁离子水平 | 第78-79页 |
| 6.3 讨论 | 第79-82页 |
| 第7章 敲低果蝇dMME1能挽救MME1-OE果蝇的羽化率缺陷 | 第82-88页 |
| 7.1 实验材料和方法 | 第82-83页 |
| 7.1.1 果蝇品系与培养条件 | 第82页 |
| 7.1.2 果蝇羽化率检测 | 第82-83页 |
| 7.1.3 果蝇胸部线粒体提取 | 第83页 |
| 7.1.4 果蝇线粒体金属离子含量检测 | 第83页 |
| 7.1.5 统计学分析 | 第83页 |
| 7.2 实验结果 | 第83-86页 |
| 7.2.1 肌肉特异性RNA干扰dMME1能部分挽救过表达酵母MME1引起的羽化率下降 | 第83-85页 |
| 7.2.2 RNA干扰dMME1能有效挽救过表达酵母MME1引起的肌肉线粒体镁离子含量下降 | 第85-86页 |
| 7.3 讨论 | 第86-88页 |
| 第8章 结论与展望 | 第88-95页 |
| 8.1 论文总结 | 第88-89页 |
| 8.2 论文讨论与展望 | 第89-95页 |
| 8.2.1 线粒体镁离子代谢的重要性 | 第89-91页 |
| 8.2.2 果蝇和酵母镁离子代谢的保守性和差异性 | 第91-93页 |
| 8.2.3 果蝇镁离子的代谢研究前景 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-108页 |
| 致谢 | 第108-110页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第110页 |
