| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 前言 | 第12-34页 |
| 1 膀胱癌及治疗现状 | 第12-13页 |
| 1.1 膀胱癌的类型 | 第12页 |
| 1.2 膀胱癌的治疗概况 | 第12-13页 |
| 2 肿瘤基因治疗 | 第13-20页 |
| 2.1 肿瘤基因治疗的概念 | 第13页 |
| 2.2 腺病毒 | 第13-14页 |
| 2.3 溶瘤腺病毒 | 第14-17页 |
| 2.4 腺病毒E1A基因的生物学功能 | 第17页 |
| 2.5 膀胱癌特异性尿路斑块蛋白（UPII）启动子 | 第17-18页 |
| 2.6 前列腺干细胞抗原增强子（PSCAE） | 第18-19页 |
| 2.7 科萨奇病毒腺病毒受体（CAR）与溶瘤腺病毒 | 第19-20页 |
| 3 细胞周期依赖性激酶抑制剂p21/Waf1 | 第20-23页 |
| 3.1 p21/Waf1的结构 | 第20-21页 |
| 3.2 p21/Waf1的功能 | 第21-22页 |
| 3.3 p21/Waf1与肿瘤的关系 | 第22页 |
| 3.4 p21/Waf1与肿瘤的相关治疗 | 第22-23页 |
| 3.5 p21/Waf1与溶瘤腺病毒 | 第23页 |
| 4 p21/Waf1对雄激素受体（androgen receptor, AR）的影响 | 第23-24页 |
| 4.1 雄激素受体概述 | 第23页 |
| 4.2 PSCAE的AR结合位点 | 第23-24页 |
| 4.3 p21/Waf1对AR的影响 | 第24页 |
| 5 前期工作和本课题研究的主要内容 | 第24-27页 |
| 5.1 前期工作 | 第24-25页 |
| 5.2 本课题的主要研究内容 | 第25-27页 |
| 参考文献 | 第27-34页 |
| 第一部分 p21/Waf1 shRNA重组慢病毒及其稳转膀胱癌细胞株的构建 | 第34-58页 |
| 1.1 实验材料 | 第34-37页 |
| 1.1.1 主要材料和试剂 | 第34-35页 |
| 1.1.2 主要溶液的配制 | 第35-36页 |
| 1.1.3 主要仪器及设备 | 第36-37页 |
| 1.2 实验方法 | 第37-48页 |
| 1.2.1 p21/Waf1 shRNA慢病毒载体的构建及鉴定 | 第37-40页 |
| 1.2.2 293 人胚肾细胞的复苏、培养及传代 | 第40-41页 |
| 1.2.3 慢病毒的包装、浓缩和滴度检测 | 第41-42页 |
| 1.2.4 慢病毒感染膀胱癌细胞株及稳定转染p21/Waf1 shRNA细胞株的筛选 | 第42-43页 |
| 1.2.5 RT-PCR法检测稳转细胞株EJ和5637中p21/Waf1的mRNA表达水平 | 第43-45页 |
| 1.2.6 Western blot法检测稳转细胞株EJ和5637中p21/Waf1的蛋白表达水平 | 第45-48页 |
| 1.2.7 统计学方法 | 第48页 |
| 1.3 结果 | 第48-51页 |
| 1.3.1 p21/Waf1 shRNA重组慢病毒载体的PCR及测序鉴定 | 第48-49页 |
| 1.3.2 重组慢病毒的滴度测定结果 | 第49页 |
| 1.3.3 重组慢病毒对膀胱癌细胞EJ和5637感染效率的测定 | 第49页 |
| 1.3.4 重组慢病毒感染膀胱癌细胞EJ和5637后p21/Waf1 mRNA的表达 | 第49-50页 |
| 1.3.5 重组慢病毒感染膀胱癌细胞EJ和5637后p21/Waf1的蛋白表达水平 | 第50-51页 |
| 1.4 讨论 | 第51-54页 |
| 1.5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 第二部分 p21/Waf1对Ad/PSCAE/UPII/E1A对膀胱癌细胞生长抑制作用及对病毒复制的影响 | 第58-82页 |
| 2.1 实验材料 | 第58-61页 |
| 2.1.1 主要材料和试剂 | 第58-59页 |
| 2.1.2 主要溶液配制 | 第59-60页 |
| 2.1.3 主要仪器及设备 | 第60-61页 |
| 2.2 实验方法 | 第61-70页 |
| 2.2.1 膀胱癌细胞EJ和5637的复苏、培养及传代 | 第61页 |
| 2.2.2 MTT比色法检测细胞活力 | 第61-62页 |
| 2.2.3 腺病毒滴度快速检测法检测p21/Waf1对Ad/PSCAE/UPII/E1A滴度的影响 | 第62-63页 |
| 2.2.4 RT-PCR和Western blot法检测p21/Waf1对Ad/PSCAE/UPII/E1A复制的影响 | 第63-67页 |
| 2.2.5 RT-PCR和Western blot法检测p21/Waf1对膀胱癌细胞中AR表达水平的影响 | 第67-69页 |
| 2.2.6 荧光素酶活性检测法检测p21/Waf1对Ad/PSCAE/UPII/E1A UPII启动子活性的影响 | 第69页 |
| 2.2.7 统计学方法 | 第69-70页 |
| 2.3 结果 | 第70-75页 |
| 2.3.1 p21/Waf1对不同MOI Ad/PSCAE/UPII/E1A对膀胱癌细胞生长抑制作用的影响 | 第70页 |
| 2.3.2 p21/Waf1对 10 MOI Ad/PSCAE/UPII/E1A在不同时间段对膀胱癌细胞生长抑制作用的影响 | 第70-71页 |
| 2.3.3 p21/Waf1对Ad/PSCAE/UPII/E1A滴度的影响 | 第71-72页 |
| 2.3.4 p21/Waf1对Ad/PSCAE/UPII/E1A病毒复制基因E1A和病毒壳蛋白hexon mRNA表达的影响 | 第72页 |
| 2.3.5 p21/Waf1对Ad/PSCAE/UPII/E1A病毒复制基因E1A和病毒壳蛋白hexon蛋白表达水平的影响 | 第72-74页 |
| 2.3.6 p21/Waf1对膀胱癌细胞中AR mRNA表达的影响 | 第74页 |
| 2.3.7 p21/Waf1对膀胱癌细胞中AR蛋白表达的影响 | 第74-75页 |
| 2.3.8 p21/Waf1对Ad/PSCAE/UPII/E1A病毒UPII启动子活性的影响 | 第75页 |
| 2.4 讨论 | 第75-79页 |
| 2.5 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-82页 |
| 第三部分 p21/Waf1对Ad/PSCAE/UPII/E1A诱导膀胱癌细胞凋亡的影响及机制 | 第82-100页 |
| 3.1 实验材料 | 第82-84页 |
| 3.1.1 主要材料和试剂 | 第82-83页 |
| 3.1.2 主要溶液配制 | 第83-84页 |
| 3.1.3 主要仪器及设备 | 第84页 |
| 3.2 实验方法 | 第84-90页 |
| 3.2.1 膀胱癌细胞EJ和5637的复苏、培养、传代 | 第84页 |
| 3.2.2 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第84-85页 |
| 3.2.3 RT-PCR法检测凋亡相关基因Fas、Bax、Bcl-2、Caspase3、Caspase8mRNA水平的变化 | 第85-87页 |
| 3.2.4 Western blot法检测凋亡相关蛋白Fas、Bax、Bcl-2、Caspase3、Caspase8、PARP的变化 | 第87-89页 |
| 3.2.5 统计学方法 | 第89-90页 |
| 3.3 结果 | 第90-94页 |
| 3.3.1 p21/Waf1对Ad/PSCAE/UPII/E1A诱导膀胱癌细胞EJ和5637凋亡的影响 | 第90-91页 |
| 3.3.2 凋亡相关基因Fas、Bax、Bcl-2、Caspase3、Caspase8 mRNA水平的变化 | 第91-92页 |
| 3.3.3 凋亡相关蛋白Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved caspase-3、caspase8、cleaved caspase-8 和cleaved PARP表达水平的变化 | 第92-94页 |
| 3.4 讨论 | 第94-97页 |
| 3.5 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-100页 |
| 中英文缩写索引 | 第100-102页 |
| 在学期间的研究成果 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
