| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第14-21页 |
| 1.1 γ-内酰胺酶 | 第14-15页 |
| 1.1.1 γ-内酰胺酶的来源 | 第14页 |
| 1.1.2 γ-内酰胺酶的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.2 定向进化方法 | 第15-18页 |
| 1.2.1 定向进化的定义和演化 | 第15-16页 |
| 1.2.2 定向进化方法的应用 | 第16-18页 |
| 1.3 计算机辅助蛋白质建模 | 第18-19页 |
| 1.3.1 蛋白质建模的程序 | 第18-19页 |
| 1.3.2 计算机辅助蛋白质建模在突变预测上的应用 | 第19页 |
| 1.4 课题研究的内容、意义和目的 | 第19-21页 |
| 1.4.1 课题研究的内容 | 第19-20页 |
| 1.4.2 课题研究的意义和目的 | 第20-21页 |
| 第二章 计算机辅助(+)γ-内酰胺酶分子设计 | 第21-36页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验仪器及软件 | 第21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-23页 |
| 2.3.1 Discovery Studio2.5分子模拟构建(+)γ-内酰胺酶蛋白模型 | 第21-22页 |
| 2.3.2 计算机辅助突变设计 | 第22-23页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第23-35页 |
| 2.4.1 Sslact-WT蛋白质模型的构建 | 第23-29页 |
| 2.4.2 蛋白质结构分析及距离评价假说的提出 | 第29-32页 |
| 2.4.3 计算机辅助突变设计 | 第32-35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 易错PCR构建突变文库 | 第36-55页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 实验仪器及材料 | 第36-37页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第36页 |
| 3.2.2 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-46页 |
| 3.3.1 菌液浓度的测定 | 第37页 |
| 3.3.2 高通量筛选方法 | 第37-38页 |
| 3.3.3 易错PCR体系的建立 | 第38-39页 |
| 3.3.4 易错PCR建立突变文库的方法步骤 | 第39-43页 |
| 3.3.5 突变体的克隆表达 | 第43-46页 |
| 3.3.6 构建突变体蛋白模型 | 第46页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第46-54页 |
| 3.4.1 绘制菌体浓度标准曲线 | 第46-47页 |
| 3.4.2 易错PCR突变文库的筛选 | 第47-49页 |
| 3.4.3 突变体的克隆表达 | 第49-53页 |
| 3.4.4 结构解析从易错PCR突变文库获得的突变体 | 第53-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 Sslact酶的定点突变和定点饱和突变 | 第55-75页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 实验仪器及材料 | 第55-56页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第55页 |
| 4.2.2 实验材料 | 第55页 |
| 4.2.3 溶液及缓冲液 | 第55-56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-61页 |
| 4.3.1 定点突变 | 第56-57页 |
| 4.3.2 定点饱和突变 | 第57-59页 |
| 4.3.3 突变体的构建 | 第59页 |
| 4.3.4 Sslact酶的蛋白纯化 | 第59页 |
| 4.3.5 蛋白浓度检测 | 第59-60页 |
| 4.3.6 内标法测定Sslact的酶活 | 第60-61页 |
| 4.3.7 构建突变体的蛋白质模型并计算相应能量 | 第61页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第61-74页 |
| 4.4.1 定点突变结果与讨论 | 第61-63页 |
| 4.4.2 定点饱和突变结果与讨论 | 第63-66页 |
| 4.4.3 双突变体的构建 | 第66-67页 |
| 4.4.4 Sslact酶的蛋白纯化 | 第67-68页 |
| 4.4.5 蛋白浓度检测 | 第68-69页 |
| 4.4.6 内标法测定Sslact的酶活 | 第69-70页 |
| 4.4.7 突变体的蛋白结构及能量解析 | 第70-74页 |
| 4.5 本章小结 | 第74-75页 |
| 第五章 突变体V2O3N/Y388H的酶学性质研究 | 第75-86页 |
| 5.1 引言 | 第75页 |
| 5.2 实验仪器及试剂 | 第75页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第75页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第75页 |
| 5.2.3 溶液及缓冲液 | 第75页 |
| 5.3 实验方法 | 第75-78页 |
| 5.3.1 最适温度 | 第75-76页 |
| 5.3.2 热稳定性 | 第76页 |
| 5.3.3 最适pH | 第76页 |
| 5.3.4 金属离子耐受性 | 第76-77页 |
| 5.3.5 酶的催化效率 | 第77-78页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第78-85页 |
| 5.4.1 最适温度 | 第78-79页 |
| 5.4.2 热稳定性 | 第79-80页 |
| 5.4.3 最适pH | 第80-81页 |
| 5.4.4 金属离子耐受性 | 第81-82页 |
| 5.4.5 酶的催化效率 | 第82-85页 |
| 5.5 本章小结 | 第85-86页 |
| 第六章 总结 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-91页 |
| 附录 | 第91-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第97-98页 |
| 作者与导师简介 | 第98-99页 |
| 附件 | 第99-100页 |
