| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 第一部分: RNA结合蛋白Rbm24a调控晶状体分化的分子机制研究 | 第10-37页 |
| 1. 研究背景 | 第10-20页 |
| 1.1. 晶状体的发生 | 第10-14页 |
| 1.2. 白内障的相关研究 | 第14-17页 |
| 1.3. 斑马鱼基因rbm24 | 第17-20页 |
| 2. 结果 | 第20-35页 |
| 2.1. 斑马鱼rbm24a基因的敲除 | 第20-26页 |
| 2.1.1. 检测靶点有效性及构建F0代斑马鱼突变体 | 第21页 |
| 2.1.2. 筛选具有germline transmission的F0代斑马鱼 | 第21-22页 |
| 2.1.3. 筛选F1代杂合体 | 第22页 |
| 2.1.4. 鉴定F2代纯合体 | 第22-25页 |
| 2.1.5. rbm24a纯合突变体在RNA水平也发生了有效突变 | 第25-26页 |
| 2.2. rbm24a纯合突变体表现晶状体混浊的表型 | 第26-27页 |
| 2.3. rbm24a基因缺失导致斑马鱼晶状体分化异常 | 第27-30页 |
| 2.4. rbm24a突变体眼睛区域凋亡增加 | 第30-31页 |
| 2.5. rbm24a缺失斑马鱼眼睛视网膜发育延迟 | 第31-32页 |
| 2.6. rbm24a缺失晶状体蛋白基因的表达下调 | 第32-33页 |
| 2.7. rbm24a对晶状体蛋白表达的调控不是通过mafba或mafa | 第33-35页 |
| 3. 总结与展望 | 第35-37页 |
| 第二部分: RNA结合蛋白Rbm24a和Rbm24b调控斑马鱼骨骼肌肌纤维完整性功能的探究 | 第37-47页 |
| 1. 研究背景 | 第37-39页 |
| 1.1. 体节的发生 | 第37-38页 |
| 1.2. rbm24在调控体节和心脏方面的研究 | 第38-39页 |
| 2. 结果 | 第39-46页 |
| 2.1. 斑马鱼rbm24b基因的敲除 | 第39-43页 |
| 2.1.1. 检测靶点有效性及构建F0代斑马鱼突变体 | 第39-40页 |
| 2.1.2. 筛选具有germline transmission的F0代斑马鱼 | 第40页 |
| 2.1.3. 筛选F1代杂合体 | 第40-41页 |
| 2.1.4. 筛选F2代纯合体 | 第41-42页 |
| 2.1.5. rbm24b纯合突变体在RNA水平也发生了有效突变 | 第42-43页 |
| 2.2. rbm24b突变后,斑马鱼胚胎发育未见明显异常 | 第43页 |
| 2.3. 制备rbm24a;rbm24b杂合双突变体 | 第43-44页 |
| 2.4. rbm24a;rbm24b纯合双突变体骨骼肌肌纤维混乱,肌小节不清晰 | 第44-46页 |
| 2.5. 制备rbm24a杂合;rbm24b纯合突变体 | 第46页 |
| 3. 总结与讨论 | 第46-47页 |
| 第三部分 :材料与方法 | 第47-67页 |
| 3.1. 实验动物 | 第47页 |
| 3.2. 利用TALENs技术构建突变体 | 第47-52页 |
| 3.2.1. 靶点的选择 | 第47-48页 |
| 3.2.2. 利用Golden Gate方法构建TALENs | 第48-52页 |
| 3.3. 利用CRISPR/Cas9技术构建突变体 | 第52-54页 |
| 3.3.1. CRISPR/Cas9靶点的选择 | 第52页 |
| 3.3.2. 构建gRNA体外转录载体 | 第52-53页 |
| 3.3.3. 制备Cas9 mRNA和gRNA | 第53-54页 |
| 3.4. mRNA和gRNA的体外转录 | 第54-55页 |
| 3.5. 显微注射 | 第55页 |
| 3.6. 基因组DNA的提取 | 第55-56页 |
| 3.7. PCR反应 | 第56-57页 |
| 3.8. RT-PCR反应 | 第57-58页 |
| 3.8.1. 斑马鱼RNA的提取 | 第57页 |
| 3.8.2. 逆转录合成cDNA (ReverTra Ace qPCR RT Kit) | 第57-58页 |
| 3.8.3. 以cDNA为模版进行PCR反应 | 第58页 |
| 3.9. 分子克隆相关方法 | 第58-59页 |
| 3.10. 斑马鱼石蜡切片 | 第59-60页 |
| 3.11. 斑马鱼冰冻切片 | 第60页 |
| 3.12. HE染色 | 第60-61页 |
| 3.13. Phalloidin和DAPI共染色及激光共聚焦显微镜观察 | 第61-62页 |
| 3.14. 斑马鱼胚胎整体原位杂交 | 第62-64页 |
| 3.15. 斑马鱼整胚AO染色 | 第64页 |
| 3.16. 斑马鱼眼部冰冻切片BrdU免疫组织化学 | 第64-65页 |
| 3.17. 斑马鱼胚胎去除色素 | 第65页 |
| 3.18. T7核酸内切酶Ⅰ(T7 endonuclease I,T7E1)鉴定基因型 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 学术论文评阅及答辩情况表 | 第78页 |
