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球孢白僵菌Ras大家族中八个小G蛋白的功能解析及其对生物防治潜能的贡献

致谢第7-11页
摘要第11-14页
1 昆虫病原真菌抗逆机制与小GTP酶的研究现状第14-24页
    1.1 胁迫损伤与抗逆机制第14-17页
        1.1.1 高温第14-15页
        1.1.2 阳光紫外辐射第15页
        1.1.3 农用化合物第15-16页
        1.1.4 氧化胁迫第16-17页
    1.2 小GTP酶概述第17-23页
        1.2.1 结构、分类及活化机理第17-18页
        1.2.2 Ras家族的功能第18-19页
        1.2.3 Rho家族的功能第19-21页
        1.2.4 小G蛋白Miro第21-23页
    1.3 展望第23-24页
2 球孢白僵菌Miro调控的线粒体动态与生防潜能之关联第24-39页
    2.1 材料第25-26页
        2.1.1 菌株及培养基第25页
        2.1.2 试剂和试剂盒第25-26页
    2.2 方法第26-31页
        2.2.1 真菌DNA和RNA提取第26-27页
        2.2.2 bMiro的结构、系统聚类及转录表达特征的分析第27页
        2.2.3 bMiro的亚细胞定位第27-28页
        2.2.4 bmiro敲除及回补株的构建第28-29页
        2.2.5 胞内ATP含量及线粒体总量测定第29页
        2.2.6 线粒体形态、分布及流动性的显微观察第29-30页
        2.2.7 细胞对金属离子胁迫的应答第30页
        2.2.8 生防潜能相关表型的评价第30-31页
        2.2.9 数据统计分析第31页
    2.3 结果第31-36页
        2.3.1 bMiro的结构与转录表达特征第31-33页
        2.3.2 bMiro的亚细胞定位第33页
        2.3.3 bmiro缺失改变胞内线粒体分布并降低线粒体总量及ATP含量第33-34页
        2.3.4 bmiro缺失降低胞内线粒体流动性及金属离子敏感性第34-36页
        2.3.5 bmiro缺失对生防潜能相关表型的影响第36页
    2.4 讨论第36-39页
3 球孢白僵菌Ras3经HOG通路调控产孢、抗逆力及毒力第39-53页
    3.1 材料第40页
        3.1.1 菌株及培养基第40页
        3.1.2 试剂和试剂盒第40页
    3.2 方法第40-43页
        3.2.1 Ras3序列结构与系统聚类分析第40页
        3.2.2 Ras3的亚细胞定位第40页
        3.2.3 ras3敲除及回补菌株的构建和鉴定第40-41页
        3.2.4 菌落生长,分生孢子产量及孢子萌发速率测定第41页
        3.2.5 药物与环境胁迫应答第41页
        3.2.6 相关基因转录水平分析第41-42页
        3.2.7 超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)总酶活检测第42-43页
        3.2.8 菌株毒力的生物测定第43页
        3.2.9 Western杂交第43页
        3.2.10 数据统计分析第43页
    3.3 结果第43-50页
        3.3.1 球孢白僵菌Ras3的结构特征、转录表达及亚细胞定位第44-46页
        3.3.2 ras3缺失对ras1和ras2转录模式的影响第46-47页
        3.3.3 Ras3对生物防治潜能的贡献第47-48页
        3.3.4 Ras3参与调控的胁迫应答第48页
        3.3.5 Ras3调控胁迫应答的机理第48-50页
    3.4 讨论第50-53页
4 球孢白僵菌Rho家族小G蛋白的功能解析第53-67页
    4.1 材料第54页
        4.1.1 菌株及培养基第54页
        4.1.2 试剂和试剂盒第54页
    4.2 方法第54-57页
        4.2.1 球孢白僵菌Rho家族小G蛋白的结构特征、转录表达及聚类分析第54-55页
        4.2.2 各Rho基因突变菌株的构建和鉴定第55页
        4.2.3 生防潜能相关表型的评价第55-57页
        4.2.4 数据统计分析第57页
    4.3 结果第57-65页
        4.3.1 球孢白僵菌Rho家族小G蛋白的基本特征第57-60页
        4.3.2 各rho缺失或点突变对球孢白僵菌生长和菌丝形态的影响第60-61页
        4.3.3 各rho缺失或点突变对球孢白僵菌产孢、孢子性状及毒力的影响第61-63页
        4.3.4 各rAo缺失或点突变株对金属离子及化学胁迫的敏感性变化第63-65页
    4.4 讨论第65-67页
5 结语第67-68页
参考文献第68-83页
Summary第83-85页
附录:攻读博士学位期间主要成果第86页

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