| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 病毒的发现 | 第12页 |
| 1.2. PRRSV的理化特性 | 第12-13页 |
| 1.3 PRRSV的病原学研究 | 第13-17页 |
| 1.3.1 病毒学分类 | 第13-14页 |
| 1.3.2 PRRSV基因结构与其编码的结构蛋白 | 第14-15页 |
| 1.3.3 PRRSV非结构蛋白的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.4 PRRSV的入侵与增殖 | 第16-17页 |
| 1.4 研究蛋白相互作用的方法 | 第17-20页 |
| 1.4.1 酵母双杂交 | 第18-19页 |
| 1.4.2 免疫共沉淀 | 第19-20页 |
| 1.4.3 GST pull-down | 第20页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 2 NSP12多克隆抗体的制备 | 第21-30页 |
| 2.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.1 病毒、载体与试验动物 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂与抗体 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 病毒感染 | 第21页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第21页 |
| 2.2.3 反转录 | 第21-22页 |
| 2.2.4 引物设计 | 第22页 |
| 2.2.5 Nsp12的扩增及克隆 | 第22-23页 |
| 2.2.6 pCold-Nsp12重组质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.7 诱导表达纯化与抗原性分析 | 第24页 |
| 2.2.8 抗体制备及效价测定 | 第24-25页 |
| 2.2.9 多克隆抗体效果检测 | 第25页 |
| 2.3 试验结果 | 第25-29页 |
| 2.3.1 pCold-Nsp12的构建及鉴定结果 | 第25-26页 |
| 2.3.2 重组质粒的诱导表达与纯化与抗原性分析 | 第26-27页 |
| 2.3.3 NSP12多抗效价测定结果 | 第27页 |
| 2.3.4 NSP12多抗的IFA鉴定结果 | 第27-28页 |
| 2.3.5 NSP12多抗的Western Blot鉴定结果 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 3 NSP12与宿主细胞相互作用蛋白的筛选 | 第30-41页 |
| 3.1 材料 | 第30-31页 |
| 3.1.1 载体、毒株及细胞 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂与抗体 | 第30页 |
| 3.1.3 引物序列 | 第30-31页 |
| 3.2 试验方法 | 第31-35页 |
| 3.2.1 PCR扩增 | 第31页 |
| 3.2.2 重组质粒的构建及鉴定 | 第31页 |
| 3.2.3 酵母双杂交筛选互作蛋白 | 第31-35页 |
| 3.3 试验结果 | 第35-40页 |
| 3.3.1 pCAGGS-NSP12的构建及鉴定结果 | 第35页 |
| 3.3.2 pCAGGS-NSP12重组蛋白的表达结果 | 第35-36页 |
| 3.3.3 转染不同时间NSP12在细胞内的定位情况 | 第36-37页 |
| 3.3.4 pGBKT7-NSP12诱饵质粒的构建结果 | 第37页 |
| 3.3.5 诱饵质粒毒性与自激活的验证结果 | 第37-38页 |
| 3.3.6 互作蛋白的筛选结果 | 第38页 |
| 3.3.7 阳性克隆PCR与序列比对结果 | 第38-39页 |
| 3.3.8 回复杂交验证双杂交结果 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 4 互作蛋白的鉴定与分析 | 第41-47页 |
| 4.1 材料 | 第41页 |
| 4.1.1 载体、毒株及细胞 | 第41页 |
| 4.1.2 主要试剂与抗体 | 第41页 |
| 4.1.3 引物设计 | 第41页 |
| 4.2 试验方法 | 第41-42页 |
| 4.2.1 重组质粒的构建及鉴定 | 第41-42页 |
| 4.2.2 转染及细胞总蛋白的提取 | 第42页 |
| 4.2.3 免疫共沉淀(CO-IP) | 第42页 |
| 4.2.4 激光共聚焦共定位 | 第42页 |
| 4.2.5 病毒滴毒的测定 | 第42页 |
| 4.3 试验结果 | 第42-46页 |
| 4.3.1 CD63与LGALS3真核表达载体的构建及鉴定结果 | 第42-43页 |
| 4.3.2 免疫共沉淀鉴定蛋白互作结果 | 第43-44页 |
| 4.3.3 NSP12与互作蛋白的亚细胞定位结果 | 第44-45页 |
| 4.3.4 病毒感染MARC-145细胞内源性LGALS3的变化 | 第45页 |
| 4.3.5 过表达LGALS3对PRRSV增殖的影响 | 第45-46页 |
| 4.4 讨论 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
