| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 番茄黄化曲叶病毒病 | 第13-14页 |
| 1.1 番茄黄化曲叶病毒 | 第13页 |
| 1.2 番茄黄化曲叶病的病症、危害及分布 | 第13页 |
| 1.3 番茄黄化曲叶病的防治 | 第13-14页 |
| 1.4 抗番茄黄化曲叶病番茄品系的培育 | 第14页 |
| 1.5 抗番茄黄化曲叶病番茄基因工程育种 | 第14页 |
| 2 TETRASPANIN3基因 | 第14-20页 |
| 2.1 TETRASPANIN3基因家族及进化 | 第14-16页 |
| 2.2 TETRASPANIN3蛋白结构 | 第16-17页 |
| 2.2.1 跨膜区域 | 第16页 |
| 2.2.2 细胞膜外环 | 第16页 |
| 2.2.3 细胞质区域 | 第16页 |
| 2.2.4 富含TETRASPANIN3蛋白的微区 | 第16-17页 |
| 2.3 TETRASPANIN3基因的功能 | 第17-19页 |
| 2.3.1 基本功能 | 第18页 |
| 2.3.2 影响细胞间及细胞与周围环境交流 | 第18页 |
| 2.3.3 对细胞的物质交换作用 | 第18-19页 |
| 2.3.4 与病毒的关系 | 第19页 |
| 2.4 植物中的TETRASPANIN3 | 第19-20页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 TETRASPANIN3基因克隆与序列分析 | 第21-28页 |
| 1 材料与方法 | 第21-23页 |
| 1.1 番茄品种 | 第21页 |
| 1.2 ETRASPANIN3基因克隆 | 第21页 |
| 1.3 TETR4SPANIN3基因特征分析 | 第21页 |
| 1.3.1 结构域分析 | 第21页 |
| 1.3.2 基因进化树 | 第21页 |
| 1.4 总RNA提取 | 第21-22页 |
| 1.5 cDNA第一链的合成 | 第22页 |
| 1.6 实时荧光定量PCR引物设计、反应体系及程序 | 第22-23页 |
| 1.7 器官表达量分析 | 第23页 |
| 1.8 番茄接种TYLCV | 第23页 |
| 2 结果与分析 | 第23-26页 |
| 2.1 TETRASPANIN3基因序列 | 第23页 |
| 2.2 氨基酸序列保守结构域分析 | 第23-24页 |
| 2.3 TETRASP4NIN3基因系统进化分析 | 第24页 |
| 2.4 提取用于组织表达分析的番茄总RNA | 第24页 |
| 2.5 TETRASPANIN3基因器官表达 | 第24-25页 |
| 2.6 提取用于番茄诱导表达分析的总RNA | 第25页 |
| 2.7 TETRASPANIN3基因诱导表达 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 TETRASPANIN3基因沉默对番茄表型和抗病性的影响 | 第28-41页 |
| 1 材料与方法 | 第28-37页 |
| 1.1 番茄品种、菌株、载体 | 第28页 |
| 1.2 植物总RNA提取提取 | 第28页 |
| 1.3 cDNA合成 | 第28页 |
| 1.4 TETRASPANIN3基因沉默载体构建 | 第28页 |
| 1.5 TETRASPANIN3基因PCR扩增 | 第28页 |
| 1.6 TETRASPANIN3基因PCR扩增产物纯化 | 第28-29页 |
| 1.7 TETRASPANIN3基因与pTRV2载体的酶切 | 第29页 |
| 1.8 TETRASPANIN3基因片段酶切产物的纯化 | 第29页 |
| 1.9 pTRV2载体酶切后胶回收 | 第29-30页 |
| 1.10 TETR4SPANIN3基因与pTRV2载体连接 | 第30页 |
| 1.11 LB培养基的配制 | 第30-31页 |
| 1.12 连接产物转化大肠杆菌转化及菌落PCR鉴定阳性克隆 | 第31-33页 |
| 1.13 测序 | 第33页 |
| 1.14 大肠杆菌质粒提取 | 第33-34页 |
| 1.15 农杆菌转化转化法转化农杆菌EHA105及菌落PCR鉴定阳性克隆 | 第34-35页 |
| 1.16 病毒介导的转基因沉默(VIGS)处理 | 第35-36页 |
| 1.17 PDS基因沉默后番茄植株 | 第36页 |
| 1.18 TETRASPANIN3基因沉默后番茄植株的表型观测 | 第36页 |
| 1.19 番茄总DNA提取 | 第36-37页 |
| 1.20 TETRASP4NIN3基因沉默后植株抗病性检测 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-39页 |
| 2.1 阳性对照结果 | 第37-38页 |
| 2.2 定量PCR测定沉默效率 | 第38页 |
| 2.3 TETRASPANIN3基因沉默后番茄植株形态 | 第38页 |
| 2.4 TETRASPANIN3基因沉默后番茄植株抗病性检测 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 过量表达TETRASPANIN3基因对转基因烟草抗病性的影响 | 第41-49页 |
| 1 材料与方法 | 第41-45页 |
| 1.1 受体材料 | 第41页 |
| 1.2 菌种及载体 | 第41页 |
| 1.3 TETRASPANIN基因克隆 | 第41页 |
| 1.4 TETRASPANIN基因片段PCR产物的纯化 | 第41页 |
| 1.5 TETR4SPANIN基因片段PCR产物加A反应 | 第41页 |
| 1.6 TETRASPANIN基因片段PCR加A产物与T载体连接 | 第41-42页 |
| 1.7 TETRASPANIN基因片段加A产物与T载体连接后产物转化大肠杆菌 | 第42页 |
| 1.8 菌液PCR鉴定 | 第42页 |
| 1.9 阳性克隆质粒DNA的序列测定 | 第42页 |
| 1.10 TETRASPANIN3基因植物表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 1.10.1 TETRASPANIN基因PCR扩增 | 第42页 |
| 1.10.2 TETRASPANIN基因PCR扩増产物的纯化 | 第42-43页 |
| 1.10.3 TETRASPANIN基因片段PCR产物加A | 第43页 |
| 1.10.4 加A后的基因片段与植物表达载体PCXSN的连接 | 第43页 |
| 1.10.5 连接产物转化大肠杆菌DH5a | 第43页 |
| 1.10.6 重组质粒鉴定 | 第43页 |
| 1.10.7 阳性克隆测序 | 第43页 |
| 1.10.8 提取重组质粒PCXSN-TETRASPANIN | 第43页 |
| 1.11 重组质粒的农杆菌转化 | 第43页 |
| 1.11.1 农杆菌LBA4404感受态制备 | 第43页 |
| 1.11.2 农杆菌LBA4404的质粒转化 | 第43页 |
| 1.12 农杆菌菌落PCR | 第43页 |
| 1.13 烟草的转化 | 第43-44页 |
| 1.14 转基因烟草的分子鉴定 | 第44页 |
| 1.14.1 烟草DNA的提取 | 第44页 |
| 1.14.2 抗潮霉素烟草PCR鉴定 | 第44页 |
| 1.14.3 转基因烟草RT-PCR检测 | 第44页 |
| 1.15 转基因烟草的抗病性分析 | 第44-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-47页 |
| 2.1 烟草植株再生 | 第45页 |
| 2.2 再生烟草PCR鉴定 | 第45-46页 |
| 2.3 T0代转基因烟草的筛选 | 第46页 |
| 2.4 T1代转基因烟草RT-PCR分析 | 第46-47页 |
| 2.5 转基因植株的抗病性分析 | 第47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| 硕士期间发表学术论文 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
