| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| ·微生物脂肪酶研究简介 | 第13-20页 |
| ·脂肪酶及其来源 | 第13-14页 |
| ·微生物脂肪酶的结构特点及酶学特性 | 第14-16页 |
| ·脂肪酶的分子生物学研究 | 第16-17页 |
| ·细菌脂肪酶的分类 | 第17-18页 |
| ·家蚕肠道产脂肪酶细菌的研究 | 第18-20页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第20-21页 |
| ·脂肪酶与核型多角体病毒 | 第21-23页 |
| ·核型多角体病毒病简介 | 第21-22页 |
| ·蚕的脂肪酶对家蚕核型多角体病毒抑制作用的研究 | 第22-23页 |
| ·家蚕抗病性及微生态制剂 | 第23-27页 |
| ·家蚕核型多角体病毒抗病性及品种选育的研究 | 第23-24页 |
| ·家蚕肠道微生态及饲用生物添加剂的研究 | 第24-27页 |
| 第二章 引言 | 第27-31页 |
| ·研究背景及意义 | 第27-28页 |
| ·研究内容 | 第28-29页 |
| ·技术路线 | 第29-31页 |
| 第三章 短小芽孢杆菌SW41脂肪酶基因Lipase的克隆及生物信息学分析 | 第31-47页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·载体及菌株 | 第31页 |
| ·主要试剂及配方 | 第31-32页 |
| ·实验仪器 | 第32页 |
| ·序列分析相关软件及工具 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-37页 |
| ·短小芽孢杆菌SW41基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·脂肪酶基因Lipase的引物合成 | 第33页 |
| ·脂肪酶基因Lipase的PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·目的基因片段回收 | 第34-35页 |
| ·目的基因片段与PMD-19T载体的连接 | 第35页 |
| ·转化大肠杆菌E.coli DH5α | 第35页 |
| ·阳性克隆的初步筛选 | 第35-36页 |
| ·提取阳性克隆质粒 | 第36页 |
| ·阳性克隆双酶切验证及测序 | 第36-37页 |
| ·脂肪酶基因的生物信息学分析 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-45页 |
| ·脂肪酶基因Lipase的PCR扩增 | 第37页 |
| ·阳性克隆的初步筛选 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆质粒双酶切验证及测序 | 第38-39页 |
| ·Lipase核酸及氨基酸序列分析 | 第39-40页 |
| ·Lipase蛋白信号肽预测 | 第40页 |
| ·Lipase蛋白跨膜区域预测 | 第40-41页 |
| ·Lipase蛋白N糖基化位点预测 | 第41页 |
| ·Lipase蛋白二级结构预测 | 第41-42页 |
| ·Lipase蛋白结构域预测 | 第42-43页 |
| ·序列同源性及系统发育分析 | 第43-45页 |
| ·小结与讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 短小芽孢杆菌SW41脂肪酶基因的原核表达及Western检测 | 第47-59页 |
| ·实验材料 | 第47-50页 |
| ·载体及菌株 | 第47页 |
| ·实验试剂及配方 | 第47-49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-53页 |
| ·表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·原核诱导表达 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE检测重组蛋白的表达情况 | 第51-52页 |
| ·重组蛋白表达形式的检测 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白的Western检测 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-57页 |
| ·阳性克隆的初步筛选 | 第53-54页 |
| ·阳性克隆质粒的双酶切验证及测序 | 第54-55页 |
| ·重组转化子的筛选 | 第55页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及表达形式的检测 | 第55-57页 |
| ·重组蛋白的Western blotting鉴定 | 第57页 |
| ·小结与讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 粗酶液中重组脂肪酶的活性检测与活力测定 | 第59-65页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·主要试剂及配方 | 第59-60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-62页 |
| ·罗丹明B平板法初步检测脂肪酶活性 | 第60页 |
| ·对硝基苯酚法测定脂肪酶活力 | 第60-61页 |
| ·BCA法测定粗酶液蛋白含量 | 第61-62页 |
| ·结果与分析 | 第62-64页 |
| ·脂肪酶活性的初步检测 | 第62-63页 |
| ·脂肪酶活力的测定 | 第63页 |
| ·含脂肪酶酶液总蛋白含量的测定 | 第63-64页 |
| ·小结与讨论 | 第64-65页 |
| 第六章 总结 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 硕士期间发表的文章及参研课题 | 第81页 |