过继转输调节性T细胞对弓形虫感染致不良妊娠结局影响的分子机制研究

【摘要】：目的：探索Treg细胞相关功能分子在早孕期弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制以及过继转输调节性T细胞对弓形虫感染致不良妊娠结局影响的分子机制。方法：为探索Treg细胞相关功能分子在早孕期弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制,建立刚地弓形虫感染孕鼠模型,设感染组和正常对照组,感染组于孕8天腹腔感染刚地弓形虫(Toxoplasma gondii, T. gondii)速殖子,孕14天颈椎脱臼处死孕鼠,记录妊娠结局。制备母胎界面(子宫、胎盘)和脾淋巴细胞悬液,流式检测Treg细胞凋亡率及Treg细胞表面抑制性分子CTLA-4和PD-1的表达水平；同时制备胎盘上清,ELISA检测TGF-β、IL-10和IFN-γ的水平。为了进一步研究过继转输调节性T细胞对弓形虫感染致不良妊娠结局影响的分子机制,分别提取正常孕鼠母胎界面和脾中Treg细胞并用CFSE标记,然后分别过继转输给弓形虫感染的孕鼠,追踪过继转输的Treg细胞在受体孕鼠体内的分布情况。实验对照组感染孕鼠注射相同剂量PBS。在孕第14天观察并记录妊娠结局,采用流式检测母胎界面和脾中CTLA-4+Treg和PD-1+Treg细胞的表达水平,同时观察来自母胎界面和脾的CFSE+Treg细胞在受体孕鼠体内的分布情况;并用ELISA检测过继转输组与对照组感染孕鼠胎盘中TGF-β、IL-10和IFN-γ的水平。结果：正常对照组孕鼠精神状态良好,胎鼠、胎盘血供正常。感染组孕鼠精神萎靡不振,耸毛、拱背,活动明显减少；胎鼠血供不足,胎鼠、胎盘形状小,重量轻,胎盘有出血坏死。感染组Treg细胞CTLA-4和PD-1表达较正常组显著降低,并且弓形虫感染可以使Treg细胞凋亡明显增加。与正常对照组比,感染组胎盘上清TGF-β/IFN-γ和IL-10/IFN-γ的比值显著下降。另外,研究发现正常孕鼠母胎界面的Treg细胞CTLA-4和PD-1的表达量比脾脏中的高。实验发现,只有当转输来自于母胎界面的Treg细胞时,妊娠结局才得到改善。过继转输母胎界面Treg细胞的感染组孕鼠相比较未转输Treg细胞的感染组孕鼠精神状态好,吸收胎率降低,胎鼠血供改善、重量增加,胎盘出血坏死情况减轻；而过继转输脾Treg细胞的感染组孕鼠的精神状态与未过继转输Treg细胞的感染组孕鼠相似,其胎鼠、胎盘的外观、重量、吸收胎率也无明显改善。此外发现,无论是来自母胎界面的Treg细胞还是来自脾的Treg细胞到达受体孕鼠相同部位(母胎界面或脾)的数量无明显差异。转输母胎界面Treg细胞的感染组孕鼠CTLA-4和PD-1增加的幅度显著高于转输脾脏Treg细胞的感染孕鼠。母胎界面TGF-β/IFN-γ和IL-10/IFN-γ的比值在转输母胎界面Treg细胞的感染组比未转输Treg的感染组显著升高,而在转输脾Treg细胞的感染组相对于未转输Treg细胞的感染组则无明显差异。结论：Treg细胞相关功能分子CTLA-4和PD-1在弓形虫感染致不良妊娠结局中发挥重要作用；过继转输母胎界面Treg细胞能显著改善弓形虫感染导致的不良妊娠结局。
【关键词】：CD4~+Foxp3~+Treg CTLA-4 PD-1 过继转输 弓形虫 不良妊娠结局
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R714.251