| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 前言 | 第12-17页 |
| 第一部分 实验材料与方法 | 第17-29页 |
| 1 实验材料 | 第17-20页 |
| ·实验动物 | 第17页 |
| ·试剂与耗材 | 第17-18页 |
| ·质粒、细胞系和抗体 | 第18-19页 |
| ·相关引物 | 第19-20页 |
| ·主要实验仪器与耗材 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-29页 |
| ·细胞的复苏、培养和传代及冻存 | 第20-21页 |
| ·质粒的转化和小量抽提 | 第21页 |
| ·总RNA抽提 | 第21-22页 |
| ·cDNA的制备 | 第22页 |
| ·质粒构建 | 第22-23页 |
| ·基因组DNA抽提 | 第23页 |
| ·淋巴细胞的单个悬浮细胞制备 | 第23页 |
| ·细胞染色及流式细胞仪检测 | 第23-24页 |
| ·细胞增殖实验 | 第24-25页 |
| ·原代B细胞的分选和体外培养 | 第25-26页 |
| ·脂质体转染 | 第26页 |
| ·蛋白印记（Western blot） | 第26-27页 |
| ·免疫共沉淀 | 第27页 |
| ·免疫小鼠 | 第27页 |
| ·免疫荧光 | 第27-28页 |
| ·酶联免疫吸附实验（ELISA） | 第28页 |
| ·统计学分析 | 第28-29页 |
| 第二部分 HRD1敲除小鼠模型建立及其表型分析 | 第29-36页 |
| 引言 | 第29页 |
| 结果 | 第29-35页 |
| 一、Hrd1在Hrd1~（f/f ）CD19cre~+小鼠中被成功敲除 | 第29-30页 |
| 二、Hrd1的缺失导致骨髓中成熟循环B细胞减少和脾脏中成熟B细胞减少，尤其是滤泡B细胞 | 第30-31页 |
| 三、Hrd1的缺失阻碍了large preB向small preB的转化 | 第31-32页 |
| 四、Hrd1的缺失使活化的成熟B细胞更易凋亡，但不影响活化B细胞的增殖、浆细胞分化和抗体产生 | 第32-33页 |
| 五、Hrd1在B细胞中特异性敲除不影响其它免疫细胞 | 第33-35页 |
| 小结 | 第35-36页 |
| 第三部分 HRD1对B细胞发育、分化和成熟影响的研究 | 第36-57页 |
| 引言 | 第36-38页 |
| 结果 | 第38-55页 |
| 一、条件性敲除B细胞系中的Hrd1导致pre-BCR在large pre-B细胞中积聚，但不影响IL-7R的表达 | 第38-41页 |
| 二、Hrd1是pre-BCR复合物的E3泛素连接酶 | 第41-44页 |
| 三、Hrd1缺失导致pre-BCR更稳定 | 第44-47页 |
| 四、条件性敲除B细胞系中的Hrd1导致轻链、Iga和BAFFR表达水平降低 | 第47-49页 |
| 五、Hrd1的缺失不影响外周B细胞的发育和增殖 | 第49-51页 |
| 六、Hrd1对B细胞的调控不依赖IRE1α 和CHOP | 第51-55页 |
| 小结 | 第55-57页 |
| 第四部分 HRD对B细胞活化诱导的凋亡影响的研究 | 第57-74页 |
| 引言 | 第57-58页 |
| 结果 | 第58-73页 |
| 一、Hrd1缺失导致体内活化的成熟B细胞更易发生AICD | 第58-59页 |
| 二、Hrd1缺失导致B细胞的TD和TI免疫反应减弱 | 第59-62页 |
| 三、Hrd1缺失导致活化成熟B细胞中Fas的蛋白水平而非mRNA水平的升高 | 第62-64页 |
| 四、Fas表达水平升高使Hrd1 KO B细胞对Fas介导的凋亡更敏感 | 第64-66页 |
| 五、Hrd1是Fas的E3泛素连接酶 | 第66-69页 |
| 六、Hrd1缺失导致Fas更稳定 | 第69-70页 |
| 七、Fas信号缺陷可以逆转Hrd1 KO小鼠中增多的AICD | 第70-73页 |
| 小结 | 第73-74页 |
| 第五部分 讨论 | 第74-77页 |
| 参考文献 | 第77-90页 |
| 泛素化和去泛素化酶在免疫系统中的调控作用研究进展 | 第90-124页 |
| 1 泛素化和去泛素化简介 | 第90-95页 |
| ·泛素化/去泛素化过程 | 第90-91页 |
| ·泛素化酶系统 | 第91-92页 |
| ·泛素化模式及其作用 | 第92-93页 |
| ·E3s识别、选择底物的机制 | 第93-94页 |
| ·免疫系统 | 第94-95页 |
| 2 泛素化/去泛素化对固有免疫系统的调控 | 第95-99页 |
| ·泛素化对TLRs信号通路的调控 | 第95-97页 |
| ·泛素化对RLR信号通路的调控 | 第97-98页 |
| ·泛素化对NLR信号通路的调控 | 第98页 |
| ·泛素化对TNF信号通路的调控 | 第98-99页 |
| 3 泛素化/去泛素化对适应性免疫系统的调控 | 第99-108页 |
| ·泛素化/去泛素化对T细胞的调控 | 第101-106页 |
| ·泛素化/去泛素化对B细胞的调控 | 第106-108页 |
| 4 总结 | 第108页 |
| 参考文献 | 第108-124页 |
| 博士期间完成的论文 | 第124-126页 |
| 附录 | 第126-128页 |
| 英文缩写 | 第126-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
