| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-25页 |
| ·植物中丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究现状 | 第12-15页 |
| ·蛋白酶抑制剂简介 | 第15-16页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂概况 | 第16-21页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂的分类 | 第16-19页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin的结构及作用机制 | 第19-20页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin的分布及功能 | 第20-21页 |
| ·昆虫中丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin的研究 | 第21-23页 |
| ·展望 | 第23页 |
| ·本研究的目标与意义 | 第23-25页 |
| 第2章 棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆及系统进化分析 | 第25-46页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·动物材料、菌种与质粒 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·培养基及其他溶液配方 | 第25-27页 |
| ·实验方法 | 第27-33页 |
| ·棉铃虫总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第28页 |
| ·棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·目的基因的纯化与回收 | 第29-30页 |
| ·制备大肠杆菌感受态细胞 | 第30页 |
| ·纯化的目的基因与T载体连接 | 第30-31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·碱裂解法小量抽提质粒DNA | 第31-32页 |
| ·重组质粒的鉴定、序列测定及菌种保存 | 第32页 |
| ·生物信息学分析 | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-45页 |
| ·Haspi-5、Haspi-6、Haspi-10 基因的克隆及重组质粒的鉴定 | 第33-35页 |
| ·Haspi-5、Haspi-6、Haspi-10 基因的序列分析 | 第35-42页 |
| ·系统进化分析 | 第42-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第3章 HASPI-5、HASPI-6 和HASPI-10 基因的原核表达 | 第46-57页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·菌种与质粒 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·Haspi-5、Haspi-6、Haspi-10 基因读码框架片段的制备 | 第47-48页 |
| ·载体pET-17b大片段的制备 | 第48页 |
| ·Haspi-5、Haspi-6、Haspi-10 基因与表达载体pET-17b的连接及转化 | 第48页 |
| ·重组质粒鉴定及对表达宿主DE3 的转化 | 第48页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌DE3 中诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第48-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-56页 |
| ·Haspi-5、Haspi-6 和Haspi-10 基因编码区的扩增 | 第50-51页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第51-53页 |
| ·重组质粒转化至E.coli DE3 | 第53-54页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 第4章 丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在棉铃虫不同组织部位的转录规律 | 第57-64页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·动物材料 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-60页 |
| ·棉铃虫幼虫各组织部位总RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第57-58页 |
| ·实时荧光定量PCR检测 | 第58-60页 |
| ·荧光引物设计 | 第58-59页 |
| ·荧光引物扩增效率的优化 | 第59页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂在棉铃虫不同组织部位的转录 | 第59-60页 |
| ·RT-qPCR数据统计与分析 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-62页 |
| ·引物特异性及扩增效率 | 第60页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在棉铃虫不同组织部位的转录规律 | 第60-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第5章 RNAI后棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因转录特征 | 第64-72页 |
| ·实验材料 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-66页 |
| ·干涉载体的构建及转化至大肠杆菌HT115 | 第64-65页 |
| ·棉铃虫的饲喂 | 第65页 |
| ·棉铃虫幼虫总RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第65-66页 |
| ·实时荧光定量PCR检测 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-70页 |
| ·干涉载体pL4440-Haspi-5 和pL4440-Haspi-6 的构建 | 第66-68页 |
| ·RNAi后丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在棉铃虫中的转录规律 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻硕期间科研情况 | 第81页 |
