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六溴环十二烷(HBCD)和菲(PHE)对菲律宾蛤仔毒性效应与污染检测技术的研究

摘要第1-8页
Abstract第8-17页
前言第17-18页
第一章 综述第18-42页
 1 海洋 POPs 来源与危害第20-23页
   ·溴系阻燃剂第20-22页
   ·多环芳烃(PAHs)第22-23页
 2 我国海洋 POPs 污染状况第23-26页
   ·我国近海 POPs 污染简介第23-24页
   ·HBCD 和 PHE 在海洋环境中的污染现状第24-26页
 3 贝类毒理学研究进展第26-29页
   ·贝类毒性实验标准第26页
   ·海洋 POPs 对贝类毒性机制的研究进展第26-29页
 4 海洋 POPs 污染监测技术研究进展第29-39页
   ·化学监测技术第29页
   ·生物监测技术第29-36页
     ·贻贝监测计划(Mussel Watch)第30-32页
     ·生物标志物第32-36页
   ·免疫化学分析技术第36-39页
     ·荧光免疫分析法第36页
     ·放射免疫分析法第36页
     ·酶联免疫分析法第36-39页
 5 论文的立题依据、研究内容和意义第39-42页
第二章 六溴环十二烷(HBCD)对菲律宾蛤仔毒性效应与生物标志物筛选的研究第42-78页
 第一节 菲律宾蛤仔在 HBCD胁迫下解毒代谢过程与损伤效应的研究第42-54页
  1 引言第42-43页
  2 材料与方法第43-47页
   ·实验材料第43页
   ·主要化学试剂与实验仪器第43-44页
   ·HBCD 染毒实验设计第44页
   ·样品制备第44-45页
     ·酶液的制备第44-45页
     ·DNA 的提取第45页
   ·实验指标的测定第45-47页
     ·7-乙氧基-异酚恶唑脱乙基酶(7-ethoxyresorufn-O-deethylase,EROD)活力测定第45页
     ·谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase,GST)活力测定第45页
     ·超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力测定第45-46页
     ·谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量测定第46页
     ·DNA 损失的测定第46页
     ·脂质过氧化的测定第46-47页
     ·蛋白含量的测定第47页
   ·数据处理与分析第47页
  3 结果第47-50页
   ·HBCD 对菲律宾蛤仔组织解毒代谢酶指标的影响第47-48页
   ·HBCD 对菲律宾蛤仔组织损伤指标的影响第48-49页
   ·菲律宾蛤仔解毒代谢酶活力、损伤与 HBCD 的相关性分析第49-50页
  4 讨论第50-54页
 第二节 菲律宾蛤仔在 HBCD胁迫下差异基因的筛选与分子生物标志物的研究第54-78页
  1 引言第54-55页
  2 材料与方法第55-68页
   ·实验材料第55页
   ·主要化学试剂与实验仪器第55-56页
   ·染毒实验设计第56页
   ·cDNA 合成第56-60页
     ·总 RNA 的提取第56页
     ·去除 RNA 中的基因组 DNA第56-57页
     ·cDNA 第一链合成第57-58页
     ·cDNA 第二链合成第58-60页
     ·柱层析第60页
   ·抑制性消减杂交第60-66页
     ·RsaⅠ消化第60-61页
     ·接头连接第61-63页
     ·第一轮杂交第63页
     ·第二轮杂交第63-64页
     ·PCR 扩增第64-65页
     ·消减效率分析第65-66页
     ·PCR 产物纯化第66页
   ·cDNA 消减文库的构建第66-67页
     ·连接反应第66页
     ·转化大肠杆菌第66页
     ·基因片段测序第66-67页
     ·序列分析第67页
   ·差异表达基因的荧光定量分析第67-68页
     ·标准曲线制作第67页
     ·Comparative Delta-delta Ct 相对定量第67-68页
     ·荧光定量所用引物第68页
  3 结果第68-75页
   ·总 RNA 和双链 cDNA 质量第68-69页
   ·接头连接效率和消减效率验证第69-70页
   ·cDNA 文库构建及 EST 序列分析第70-73页
   ·差异基因的表达分析第73-75页
  4 讨论第75-78页
第三章 菲(PHE)对菲律宾蛤仔毒性效应与生物标志物筛选的研究第78-85页
 1 引言第78页
 2 材料与方法第78-79页
   ·实验材料第78-79页
   ·实验方法第79页
 3 结果第79-82页
   ·PHE 对菲律宾蛤仔组织解毒代谢酶指标的影响第79-80页
   ·PHE 对菲律宾蛤仔组织损伤指标的影响第80-81页
   ·菲律宾蛤仔组织解毒代谢酶活力、损伤与 PHE 的相关性分析第81-82页
 4 讨论第82-85页
第四章 多环芳烃—菲(PHE)酶联免疫(ELISA)分析方法的研究第85-93页
 1 引言第85页
 2 材料与方法第85-88页
   ·实验材料第85-86页
     ·实验动物第85页
     ·试剂与仪器第85-86页
   ·菲半抗原和菲-蛋白偶联物的制备第86页
     ·菲半抗原的制备第86页
     ·菲完全抗原的制备第86页
     ·菲包被抗原的制备第86页
     ·完全抗原与包被抗原的检测第86页
   ·抗菲抗体的制备第86-87页
   ·ELISA 方法的建立第87-88页
     ·抗体效价的测定第87页
     ·竞争 ELISA 标准曲线的制作第87-88页
     ·IC50和最低检测限的确定第88页
 3 结果第88-90页
   ·半抗原偶联物检测结果第88-89页
   ·包被抗原、抗体稀释度的确定第89-90页
   ·竞争 ELISA 标准曲线的制作第90页
   ·试剂盒最低检测线的测定第90页
 4 讨论第90-93页
   ·连接臂与连接方法的选择第90-91页
   ·载体蛋白的选择第91-92页
   ·免疫动物的选择第92页
   ·动物免疫过程第92页
   ·ELISA 方法的影响因素第92-93页
论文总结第93-94页
参考文献第94-118页
致谢第118-119页
个人简历第119-120页
发表的学术论文第120-121页

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