摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-17页 |
前言 | 第17-18页 |
第一章 综述 | 第18-42页 |
1 海洋 POPs 来源与危害 | 第20-23页 |
·溴系阻燃剂 | 第20-22页 |
·多环芳烃(PAHs) | 第22-23页 |
2 我国海洋 POPs 污染状况 | 第23-26页 |
·我国近海 POPs 污染简介 | 第23-24页 |
·HBCD 和 PHE 在海洋环境中的污染现状 | 第24-26页 |
3 贝类毒理学研究进展 | 第26-29页 |
·贝类毒性实验标准 | 第26页 |
·海洋 POPs 对贝类毒性机制的研究进展 | 第26-29页 |
4 海洋 POPs 污染监测技术研究进展 | 第29-39页 |
·化学监测技术 | 第29页 |
·生物监测技术 | 第29-36页 |
·贻贝监测计划(Mussel Watch) | 第30-32页 |
·生物标志物 | 第32-36页 |
·免疫化学分析技术 | 第36-39页 |
·荧光免疫分析法 | 第36页 |
·放射免疫分析法 | 第36页 |
·酶联免疫分析法 | 第36-39页 |
5 论文的立题依据、研究内容和意义 | 第39-42页 |
第二章 六溴环十二烷(HBCD)对菲律宾蛤仔毒性效应与生物标志物筛选的研究 | 第42-78页 |
第一节 菲律宾蛤仔在 HBCD胁迫下解毒代谢过程与损伤效应的研究 | 第42-54页 |
1 引言 | 第42-43页 |
2 材料与方法 | 第43-47页 |
·实验材料 | 第43页 |
·主要化学试剂与实验仪器 | 第43-44页 |
·HBCD 染毒实验设计 | 第44页 |
·样品制备 | 第44-45页 |
·酶液的制备 | 第44-45页 |
·DNA 的提取 | 第45页 |
·实验指标的测定 | 第45-47页 |
·7-乙氧基-异酚恶唑脱乙基酶(7-ethoxyresorufn-O-deethylase,EROD)活力测定 | 第45页 |
·谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase,GST)活力测定 | 第45页 |
·超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力测定 | 第45-46页 |
·谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量测定 | 第46页 |
·DNA 损失的测定 | 第46页 |
·脂质过氧化的测定 | 第46-47页 |
·蛋白含量的测定 | 第47页 |
·数据处理与分析 | 第47页 |
3 结果 | 第47-50页 |
·HBCD 对菲律宾蛤仔组织解毒代谢酶指标的影响 | 第47-48页 |
·HBCD 对菲律宾蛤仔组织损伤指标的影响 | 第48-49页 |
·菲律宾蛤仔解毒代谢酶活力、损伤与 HBCD 的相关性分析 | 第49-50页 |
4 讨论 | 第50-54页 |
第二节 菲律宾蛤仔在 HBCD胁迫下差异基因的筛选与分子生物标志物的研究 | 第54-78页 |
1 引言 | 第54-55页 |
2 材料与方法 | 第55-68页 |
·实验材料 | 第55页 |
·主要化学试剂与实验仪器 | 第55-56页 |
·染毒实验设计 | 第56页 |
·cDNA 合成 | 第56-60页 |
·总 RNA 的提取 | 第56页 |
·去除 RNA 中的基因组 DNA | 第56-57页 |
·cDNA 第一链合成 | 第57-58页 |
·cDNA 第二链合成 | 第58-60页 |
·柱层析 | 第60页 |
·抑制性消减杂交 | 第60-66页 |
·RsaⅠ消化 | 第60-61页 |
·接头连接 | 第61-63页 |
·第一轮杂交 | 第63页 |
·第二轮杂交 | 第63-64页 |
·PCR 扩增 | 第64-65页 |
·消减效率分析 | 第65-66页 |
·PCR 产物纯化 | 第66页 |
·cDNA 消减文库的构建 | 第66-67页 |
·连接反应 | 第66页 |
·转化大肠杆菌 | 第66页 |
·基因片段测序 | 第66-67页 |
·序列分析 | 第67页 |
·差异表达基因的荧光定量分析 | 第67-68页 |
·标准曲线制作 | 第67页 |
·Comparative Delta-delta Ct 相对定量 | 第67-68页 |
·荧光定量所用引物 | 第68页 |
3 结果 | 第68-75页 |
·总 RNA 和双链 cDNA 质量 | 第68-69页 |
·接头连接效率和消减效率验证 | 第69-70页 |
·cDNA 文库构建及 EST 序列分析 | 第70-73页 |
·差异基因的表达分析 | 第73-75页 |
4 讨论 | 第75-78页 |
第三章 菲(PHE)对菲律宾蛤仔毒性效应与生物标志物筛选的研究 | 第78-85页 |
1 引言 | 第78页 |
2 材料与方法 | 第78-79页 |
·实验材料 | 第78-79页 |
·实验方法 | 第79页 |
3 结果 | 第79-82页 |
·PHE 对菲律宾蛤仔组织解毒代谢酶指标的影响 | 第79-80页 |
·PHE 对菲律宾蛤仔组织损伤指标的影响 | 第80-81页 |
·菲律宾蛤仔组织解毒代谢酶活力、损伤与 PHE 的相关性分析 | 第81-82页 |
4 讨论 | 第82-85页 |
第四章 多环芳烃—菲(PHE)酶联免疫(ELISA)分析方法的研究 | 第85-93页 |
1 引言 | 第85页 |
2 材料与方法 | 第85-88页 |
·实验材料 | 第85-86页 |
·实验动物 | 第85页 |
·试剂与仪器 | 第85-86页 |
·菲半抗原和菲-蛋白偶联物的制备 | 第86页 |
·菲半抗原的制备 | 第86页 |
·菲完全抗原的制备 | 第86页 |
·菲包被抗原的制备 | 第86页 |
·完全抗原与包被抗原的检测 | 第86页 |
·抗菲抗体的制备 | 第86-87页 |
·ELISA 方法的建立 | 第87-88页 |
·抗体效价的测定 | 第87页 |
·竞争 ELISA 标准曲线的制作 | 第87-88页 |
·IC50和最低检测限的确定 | 第88页 |
3 结果 | 第88-90页 |
·半抗原偶联物检测结果 | 第88-89页 |
·包被抗原、抗体稀释度的确定 | 第89-90页 |
·竞争 ELISA 标准曲线的制作 | 第90页 |
·试剂盒最低检测线的测定 | 第90页 |
4 讨论 | 第90-93页 |
·连接臂与连接方法的选择 | 第90-91页 |
·载体蛋白的选择 | 第91-92页 |
·免疫动物的选择 | 第92页 |
·动物免疫过程 | 第92页 |
·ELISA 方法的影响因素 | 第92-93页 |
论文总结 | 第93-94页 |
参考文献 | 第94-118页 |
致谢 | 第118-119页 |
个人简历 | 第119-120页 |
发表的学术论文 | 第120-121页 |