| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1 马铃薯甲虫的发生危害与防治 | 第12-15页 |
| ·马铃薯甲虫的发生危害 | 第12页 |
| ·马铃薯甲虫的防治 | 第12-15页 |
| 2 保幼激素合成、降解和信号转导途径的研究进展 | 第15-23页 |
| ·保幼激素合成的研究进展 | 第15-19页 |
| ·保幼激素(JHⅢ)的生物合成过程 | 第15-17页 |
| ·保幼激素合成相关酶的研究 | 第17-19页 |
| ·保幼激素降解的研究进展 | 第19-21页 |
| ·保幼激素的降解过程 | 第19-20页 |
| ·保幼激素降解相关酶的研究 | 第20-21页 |
| ·保幼激素信号转导途径的研究进展 | 第21-23页 |
| ·保幼激素受体 | 第21-22页 |
| ·保幼激素和蜕皮协同调控昆虫的发育 | 第22-23页 |
| 3 RNA干扰的研究进展 | 第23-26页 |
| ·RNA干扰的历史 | 第23-24页 |
| ·昆虫RNA干扰的研究 | 第24页 |
| ·昆虫RNA干扰的方法 | 第24-26页 |
| ·显微注射法递送dsRNA | 第24页 |
| ·浸泡法递送dsRNA | 第24-25页 |
| ·喂食法递送dsRNA | 第25页 |
| ·GAL4/UAS转基因技术系统 | 第25页 |
| ·转基因植物 | 第25页 |
| ·病毒介导 | 第25-26页 |
| 4 本研究的立题背景和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 马铃薯甲虫保幼激素合成相关基因的克隆级及不同发育阶段的相对表达量 | 第28-46页 |
| 摘要 | 第28页 |
| 1 材料与方法 | 第28-37页 |
| ·供试昆虫 | 第28页 |
| ·主要试剂和仪器设备 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-37页 |
| ·总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第30-31页 |
| ·PCR 引物 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增体系及条件 | 第32-33页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第33页 |
| ·连接和转化实验 | 第33-34页 |
| ·测序分析 | 第34页 |
| ·荧光定量PCR反应 | 第34-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-43页 |
| ·马铃薯甲虫保幼激素合成相关基因的克隆及序列分析 | 第37-42页 |
| ·保幼激素酸甲基转移酶的克隆及序列分析 | 第37-38页 |
| ·法尼酸甲基转移酶的克隆及序列分析 | 第38-39页 |
| ·腺苷高半胱氨酸水解酶的克隆及序列分析 | 第39-42页 |
| ·保幼激素合成相关基因在不同发育阶段的相对表达量 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 马铃薯甲虫保幼激素合成相关基因的RNA干扰效应 | 第46-64页 |
| 摘要 | 第46-47页 |
| 1 材料与方法 | 第47-53页 |
| ·供试昆虫 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·大肠杆菌发酵生产dsRNA | 第47-50页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·dsRNA表达载体的构建 | 第47-49页 |
| ·载体表达dsRNA验证 | 第49-50页 |
| ·喂食dsRNA试验方法 | 第50页 |
| ·保幼激素类似物对RNA干扰效应的补偿实验 | 第50-51页 |
| ·保幼激素类似物吡丙醚对马铃薯甲虫2龄幼虫的触杀毒力 | 第50页 |
| ·吡丙醚对RNA干扰效应的补偿实验 | 第50-51页 |
| ·荧光定量PCR反应 | 第51-53页 |
| ·引物设计 | 第51页 |
| ·RNA提取 | 第51-52页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第52-53页 |
| ·荧光定量PCR反应 | 第53页 |
| ·基因相对表达量分析 | 第53页 |
| ·数据统计方法 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-63页 |
| ·保幼激素合成相关基因dsRNA表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·喂食表达dsRNA的大肠杆菌对马铃薯甲虫进行RNA干扰 | 第55-59页 |
| ·马铃薯甲虫的表型变化 | 第55-56页 |
| ·连续喂食dsRNA对马铃薯甲虫存活率的影响 | 第56-57页 |
| ·连续喂食dsRNA对马铃薯甲虫体重的影响 | 第57-58页 |
| ·连续喂食dsRNA对靶基因表达量的影响 | 第58-59页 |
| ·保幼激素类似物吡丙醚对基因沉默的补偿效应 | 第59-63页 |
| ·吡丙醚对2龄幼虫的触杀毒力 | 第59-60页 |
| ·吡丙醚与dsRNA共同施用对马铃薯甲虫死亡率的影响 | 第60-62页 |
| ·吡丙醚与dsRNA共同施用对靶基因表达量的影响 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-64页 |
| 第四章 马铃薯甲虫JH信号转导相关基因的克隆及干扰JH代谢基因对其表达的影响 | 第64-76页 |
| 摘要 | 第64页 |
| 1 材料与方法 | 第64-66页 |
| ·供试昆虫 | 第64页 |
| ·主要试剂和仪器设备 | 第64页 |
| ·PCR扩增与RACE | 第64-66页 |
| ·总RNA的提取 | 第64-65页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第65页 |
| ·PCR引物 | 第65页 |
| ·PCR扩增体系及条件 | 第65页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第65页 |
| ·连接和转化实验 | 第65-66页 |
| ·测序分析 | 第66页 |
| ·实时定量PCR | 第66页 |
| ·引物设计 | 第66页 |
| ·RNA提取 | 第66页 |
| ·荧光定量PCR反应 | 第66页 |
| ·数据统计方法 | 第66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-74页 |
| ·马铃薯甲虫保幼激素信号转导途径相关基因的克隆及序列分析 | 第66-72页 |
| ·核受体转录激活因子2的克隆与序列分析 | 第67-69页 |
| ·烯虫酯耐受蛋白的克隆与序列分析 | 第69页 |
| ·Kruppel-homolog 1的克隆与序列分析 | 第69-70页 |
| ·Broad家族基因的克隆与序列分析 | 第70-72页 |
| ·RNA干扰沉默JH合成基因对信号转导相关基因的影响 | 第72-73页 |
| ·保幼激素类似物吡丙醚对信号转导相关基因的补偿效应 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-76页 |
| 全文总结 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第86-88页 |
| 附录 | 第88-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
