| 英文缩写符号及中英文对照表 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-19页 |
| ·细胞程序性死亡的分类及其特征 | 第13-14页 |
| ·细胞程序性死亡发生的调控 | 第14-16页 |
| ·Caspase 细胞死亡执行者 | 第14-15页 |
| ·Bcl-2 家族 细胞死亡的调节阀 | 第15-16页 |
| ·细胞程序性死亡相关基因及其功能 | 第16-18页 |
| ·BI-1 的结构与功能 | 第16页 |
| ·HSP70 的结构与功能 | 第16-17页 |
| ·BAG 的结构与功能 | 第17-18页 |
| ·本研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-32页 |
| ·试验材料 | 第19-21页 |
| ·试材 | 第19页 |
| ·菌株与质粒 | 第19页 |
| ·酶及生化试剂 | 第19页 |
| ·PCR 引物 | 第19-21页 |
| ·试验处理 | 第21页 |
| ·不同品种、组织苹果砧木处理 | 第21页 |
| ·不同生长时期处理 | 第21页 |
| ·高温胁迫处理 | 第21页 |
| ·正常生长管理处理 | 第21页 |
| ·2,4-D 处理 | 第21页 |
| ·干湿交替处理 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-32页 |
| ·平邑甜茶总 RNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·RT-PCR 反转录合成 cDNA | 第22页 |
| ·MhBI-1 序列的扩增 | 第22-24页 |
| ·PCR 扩增 MhBI-1 保守序列 | 第22-23页 |
| ·3'-RACE 扩增 3' 端序列 | 第23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| ·测序分析 | 第23-24页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第24页 |
| ·制备和转化大肠杆菌感受态细胞 | 第24页 |
| ·制备大肠杆菌感受态细胞 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第24页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·凝胶电泳中 DNA 片段的回收 | 第25页 |
| ·质粒 DNA 的酶切鉴定 | 第25-26页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第26页 |
| ·基因测序 | 第26页 |
| ·pET-30a-MhBI-1 原核表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·原核表达重组菌株的诱导表达及电泳分析 | 第27页 |
| ·pBI121-正义/反义表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·制备与转化根癌农杆菌 GV3101 感受态细胞 | 第28页 |
| ·制备根癌农杆菌 GV3101 感受态细胞 | 第28页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第28页 |
| ·拟南芥转化及转化植株的 PCR 鉴定 | 第28-29页 |
| ·拟南芥转化 | 第28-29页 |
| ·转基因植株筛选及鉴定 | 第29页 |
| ·半定量 RT-PCR 分析 | 第29页 |
| ·实时荧光定量 PCR 鉴定 | 第29-30页 |
| ·生物信息学分析 | 第30页 |
| ·细胞死亡率测定 | 第30-31页 |
| ·类 caspases3/7 蛋白酶活性检测 | 第31页 |
| ·根活力测定 | 第31页 |
| ·ATP 含量测定 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-48页 |
| ·平邑甜茶抗凋亡基因 MhBI-1 克隆及其表达分析 | 第32-39页 |
| ·MhBI-1 基因的克隆与序列分析 | 第32-33页 |
| ·MhBI-1 保守序列的分离 | 第32页 |
| ·MhBI-13’片段的分离 | 第32页 |
| ·MhBI-1 基因的获得 | 第32-33页 |
| ·平邑甜茶 MhBI-1 编码蛋白的结构分析 | 第33-35页 |
| ·MhBI-1 蛋白的保守域分析 | 第33-34页 |
| ·部分植物 BI-1 蛋白序列多重比对 | 第34页 |
| ·MhBI-1 蛋白的系统进化树分析 | 第34页 |
| ·MhBI-1 蛋白的理化性质分析 | 第34-35页 |
| ·MhBI-1 蛋白的信号肽分析 | 第35页 |
| ·MhBI-1 蛋白跨膜结构域预测 | 第35页 |
| ·MhBI-1 蛋白亚细胞定位分析 | 第35页 |
| ·MhBI-1 蛋白的二级结构预测 | 第35页 |
| ·MhBI-1 原核表达分析 | 第35-36页 |
| ·MhBI-1 原核表达载体的构建及原核表达 | 第35-36页 |
| ·MhBI-1 植物表达载体构建及转化拟南芥 | 第36-37页 |
| ·MdBI-1s 基因家族表达分析 | 第37-39页 |
| ·MdBI-1s 在四种苹果砧木根、茎和叶中的表达 | 第38页 |
| ·MdBI-1s 在平邑甜茶根生长发育过程中的表达 | 第38-39页 |
| ·高温胁迫下平邑甜茶根 MdBI-1s 的表达 | 第39页 |
| ·平邑甜茶吸收根和延长根细胞死亡及其抗凋亡基因表达 | 第39-42页 |
| ·平邑甜茶延长根和吸收根细胞死亡率变化 | 第39-40页 |
| ·平邑甜茶延长根和吸收根细胞死亡相关代谢变化 | 第40-41页 |
| ·平邑甜茶延长根和吸收根根系活力的变化 | 第40页 |
| ·平邑甜茶延长根和吸收根 ATP 含量的变化 | 第40页 |
| ·平邑甜茶延长根和吸收根类 caspase3/7 活性变化 | 第40-41页 |
| ·平邑甜茶延长根和吸收根 MhBI-1 表达变化 | 第41页 |
| ·平邑甜茶延长根和吸收根 MhHSP70 表达变化 | 第41-42页 |
| ·平邑甜茶延长根和吸收根 MhBAG 表达变化 | 第42页 |
| ·2,4-D 对新根细胞死亡及抗凋亡基因表达的调节 | 第42-45页 |
| ·新根细胞死亡率对 2,4-D 的响应 | 第42-43页 |
| ·新根细胞死亡相关代谢对 2,4-D 的响应 | 第43页 |
| ·新根根系活力对 2,4-D 的响应 | 第43页 |
| ·新根 ATP 含量对 2,4-D 的响应 | 第43页 |
| ·新根类 caspase3/7 活性对 2,4-D 的响应 | 第43页 |
| ·新根 MhBI-1 对 2,4-D 的响应 | 第43-44页 |
| ·新根 MhHSP70 对 2,4-D 的响应 | 第44页 |
| ·新根 MhBAG 对 2,4-D 的响应 | 第44-45页 |
| ·干湿交替作用下新根细胞死亡及抗凋亡基因表达 | 第45-48页 |
| ·干湿交替作用下新根细胞死亡率变化 | 第45页 |
| ·干湿交替作用下新根细胞死亡相关代谢的变化 | 第45-47页 |
| ·干湿交替作用下新根根系活力的变化 | 第45-46页 |
| ·干湿交替作用下新根 ATP 含量的变化 | 第46页 |
| ·干湿交替作用下新根类 caspase3/7 活性变化 | 第46-47页 |
| ·干湿交替作用下新根 MhBI-1 表达变化 | 第47页 |
| ·干湿交替作用下新根 MhHSP70 表达变化 | 第47页 |
| ·干湿交替作用下新根 MhBAG 表达变化 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| ·平邑甜茶 MhBI-1 基因的克隆及表达分析 | 第48-49页 |
| ·平邑甜茶 MhBI-1 基因的克隆及生物信息学、原核表达分析 | 第48页 |
| ·苹果 MdBI-1s 表达分析 | 第48-49页 |
| ·平邑甜茶新根细胞死亡及其基因表达 | 第49-51页 |
| ·平邑甜茶新根在正常管理下的死亡及其基因表达 | 第49-50页 |
| ·2,4-D 及干湿交替作用下平邑甜茶新根死亡及其基因表达 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第62页 |
