| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-36页 |
| ·纤维素、半纤维素的结构及其水解酶 | 第14-17页 |
| ·纤维素的化学组成及纤维素酶 | 第14-15页 |
| ·半纤维素的化学组成及半纤维素酶 | 第15-17页 |
| ·纤维素酶、半纤维素酶的研究进展 | 第17-24页 |
| ·纤维素酶的来源、结构与分类 | 第17-19页 |
| ·半纤维素酶的来源、结构与分类 | 第19-23页 |
| ·纤维素酶、半纤维素酶的催化机理 | 第23-24页 |
| ·耐热纤维素酶、半纤维素酶及其研究手段 | 第24-27页 |
| ·同源序列比对 | 第25页 |
| ·系统发育重建 | 第25页 |
| ·蛋白结构解析和同源建模 | 第25-26页 |
| ·基于理论设计的定点突变研究 | 第26-27页 |
| ·Thermotoga maritima ATCC 43589 和 Thermotoga thermarum DSM 5069 | 第27页 |
| ·Thermotoga maritima ATCC 43589 | 第27页 |
| ·Thermotoga thermarum DSM 5069 | 第27页 |
| ·立题背景及研究内容 | 第27页 |
| 参考文献 | 第27-36页 |
| 第二章 Thermotoga maritima 内切葡聚糖酶 Cel12B 进化分析及耐热机理研究 | 第36-49页 |
| ·前言 | 第36页 |
| ·材料与方法 | 第36-37页 |
| ·数据库中适宜序列的筛选 | 第36页 |
| ·多重序列比对与系统发育研究 | 第36-37页 |
| ·二级结构预测 | 第37页 |
| ·功能残基鉴定 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-45页 |
| ·蛋白质氨基酸序列特征 | 第38页 |
| ·系统发育分析 | 第38-42页 |
| ·保守和催化氨基酸分析 | 第42-43页 |
| ·极耐热内切葡聚糖糖酶 Cel12B 同源建模 | 第43-44页 |
| ·功能氨基酸突变分析 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 第三章 Thermotoga maritima 极耐热葡聚糖酶与 CBD 融合的研究 | 第49-58页 |
| ·前言 | 第49页 |
| ·材料与方法 | 第49-52页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·细菌菌株和质粒 | 第50页 |
| ·基因组 DNA 的提取和扩增 | 第50-51页 |
| ·表达载体的构建与测序 | 第51页 |
| ·Cel12B-CBD 融合蛋白的表达及其纯化 | 第51页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第51页 |
| ·酶活测定 | 第51页 |
| ·Cel12B-CBD 融合蛋白酶学性质测定 | 第51页 |
| ·融合蛋白对天然纤维素分解实验 | 第51-52页 |
| ·融合蛋白吸附实验 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-55页 |
| ·重组融合蛋白鉴定 | 第52页 |
| ·重组融合蛋白酶学性质 | 第52-54页 |
| ·融合酶吸附结晶纤维素 | 第54页 |
| ·融合酶降解底物特异性 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
| 第四章 Thermotoga thermarum 耐热木聚糖酶 B 的克隆、高效表达和酶学性质研究 | 第58-71页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·材料与方法 | 第58-61页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·细菌菌株和质粒 | 第58-59页 |
| ·基因组 DNA 的提取和扩增 | 第59页 |
| ·表达载体的构建与测序 | 第59页 |
| ·木聚糖酶 Xyn10B 的表达及其纯化 | 第59页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第59页 |
| ·酶活测定 | 第59-60页 |
| ·木聚糖酶 Xyn10B 的生化定性 | 第60页 |
| ·底物特异性和动力学性质的测定 | 第60页 |
| ·水解产物分析 | 第60页 |
| ·生物信息学分析 | 第60-61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-68页 |
| ·木糖苷酶 Xyn10B 基因的克隆、表达载体的构建、测序及其生物信息学分析 | 第61-64页 |
| ·Xyn10B 木聚糖酶在 E. coli 中的诱导表达和纯化 | 第64-65页 |
| ·Xyn10B 的生化定性 | 第65-67页 |
| ·水解产物的分析 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 第五章 Thermotoga thermarum 极耐热木聚糖酶 A 的克隆、表达、酶学性质研究及耐热机理初探 | 第71-84页 |
| ·前言 | 第71页 |
| ·材料和方法 | 第71-73页 |
| ·xyn10A 基因、质粒和培养基 | 第71页 |
| ·DNA 操纵和质粒的构建 | 第71-72页 |
| ·重组木聚糖酶 Xyn10A 的表达和纯化 | 第72页 |
| ·生化性质测定 | 第72页 |
| ·水解产物的分析 | 第72-73页 |
| ·多序列比对和系统发育分析 | 第73页 |
| ·三维结构预测 | 第73页 |
| ·圆二色谱光谱测定温度变化值 | 第73页 |
| ·结果与分析 | 第73-78页 |
| ·Xyn10A 的克隆和序列分析 | 第73页 |
| ·重组木聚糖酶 Xyn10A 的表达和纯化 | 第73-74页 |
| ·木聚糖酶 Xyn10A 的生化定性 | 第74-75页 |
| ·Xyn10A 降解木聚糖 | 第75-76页 |
| ·Xyn10A 的系统发生树和催化残基 | 第76-77页 |
| ·CD 表征结果分析 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-81页 |
| 参考文献 | 第81-84页 |
| 第六章 Thermotoga thermarum β-木糖苷酶/α-阿拉伯糖苷酶的克隆、表达及酶学性质研究 | 第84-97页 |
| ·前言 | 第84页 |
| ·材料与方法 | 第84-87页 |
| ·菌株、质粒及培养基 | 第84-85页 |
| ·基因操作 | 第85页 |
| ·质粒构建 | 第85页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第85页 |
| ·β-木糖苷酶/α-阿拉伯糖苷酶酶学性质测定 | 第85-86页 |
| ·Tth xynB3 β-木糖苷酶系统发育学研究 | 第86页 |
| ·Tth xynB3 β-木糖苷酶对低聚木糖的水解研究 | 第86-87页 |
| ·结果与分析 | 第87-92页 |
| ·Tth xynB3 β-木糖苷酶的克隆和序列分析 | 第87页 |
| ·Tth xynB3 β-木糖苷酶的表达与纯化 | 第87-88页 |
| ·Tth xynB3 β-木糖苷酶的酶学性质分析 | 第88-89页 |
| ·Tth xynB3 β-木糖苷酶底物特异性及耐木糖性能 | 第89-90页 |
| ·Tth xynB3 β-木糖苷酶对低聚糖的降解 | 第90-91页 |
| ·Tth xynB3 β-木糖苷酶的系统发育分析 | 第91-92页 |
| ·讨论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-97页 |
| 第七章 Thermotoga thermarum β-甘露糖苷酶的克隆、高效表达和酶学性质研究 | 第97-111页 |
| ·前言 | 第97页 |
| ·材料与方法 | 第97-100页 |
| ·细菌菌株和培养条件 | 第97页 |
| ·质粒构建 | 第97-98页 |
| ·重组β-甘露糖苷酶的表达与纯化 | 第98页 |
| ·酶活测定和温度、pH 值对酶活的影响 | 第98-99页 |
| ·底物特异性 | 第99页 |
| ·1,4-β-D-甘露聚糖降解实验 | 第99页 |
| ·生物信息学分析 | 第99-100页 |
| ·氨基酸序列检索号 | 第100页 |
| ·结果与分析 | 第100-106页 |
| ·Tth Man5 β-甘露糖苷酶氨基酸序列分析 | 第100-101页 |
| ·Tth Man5 β-甘露糖苷酶的高效表达和纯化 | 第101-102页 |
| ·Tth Man5 β-甘露糖苷酶的生化性质 | 第102-104页 |
| ·Tth Man5 β-甘露糖苷酶水解 1,4-β-D-甘露聚糖分析 | 第104页 |
| ·Tth Man5 β-甘露糖苷酶系统发育分析 | 第104-106页 |
| ·讨论 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-111页 |
| 第八章 Thermotoga thermarum 阿拉伯多糖酶的克隆、表达与酶学性质分析 | 第111-123页 |
| ·前言 | 第111页 |
| ·材料与方法 | 第111-113页 |
| ·底物 | 第111页 |
| ·菌株和生长条件 | 第111页 |
| ·构建质粒和菌株 | 第111-112页 |
| ·阿拉多糖酶的表达和纯化 | 第112页 |
| ·酶的生化性质 | 第112-113页 |
| ·底物特异性 | 第113页 |
| ·生物信息学分析 | 第113页 |
| ·核苷酸序列编号 | 第113页 |
| ·结果与分析 | 第113-118页 |
| ·T. thermarum 阿拉伯多糖酶的序列分析 | 第113-115页 |
| ·阿拉伯糖酶的表达和纯化 | 第115-116页 |
| ·Tth Abn 阿拉伯糖酶的生化性质 | 第116-117页 |
| ·阿拉伯多糖酶的水解 | 第117-118页 |
| ·Tth Abn 阿拉伯多糖酶进化分析 | 第118页 |
| ·讨论 | 第118-121页 |
| 参考文献 | 第121-123页 |
| 第九章 全文总结 | 第123-125页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第125-126页 |
