| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述及选题目的和意义 | 第11-17页 |
| 第一节 海豚链球菌的研究概述 | 第11-16页 |
| 1. 海豚链球菌的基本特性及危害 | 第11-12页 |
| ·海豚链球菌的基本特性 | 第11页 |
| ·海豚链球菌的危害 | 第11-12页 |
| 2. 海豚链球菌主要毒力因子及其致病性 | 第12-13页 |
| 3. 海豚链球菌荚膜多糖毒力因子CpsD研究进展 | 第13-16页 |
| ·海豚链球菌荚膜多糖的基因序列的特征 | 第13页 |
| ·海豚链球菌荚膜多糖的功能 | 第13-15页 |
| ·海豚链球菌毒力因子CpsD | 第15-16页 |
| 第二节 选题的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 试验研究 | 第17-72页 |
| 第一节 海豚链球菌cpsD基因的克隆、鉴定及分子特性分析 | 第17-38页 |
| 1. 试验材料 | 第17-18页 |
| ·菌株及载体 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·主要溶液及培养基的配置 | 第17-18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18页 |
| 2. 试验方法 | 第18-23页 |
| ·特异性引物的设计 | 第18页 |
| ·海豚链球菌基因组DNA的提取 | 第18页 |
| ·cpsD基因的PCR扩增 | 第18-19页 |
| ·cpsD基因的T克隆与鉴定 | 第19-22页 |
| ·核酸序列特征分析 | 第22页 |
| ·蛋白质序列特征分析 | 第22页 |
| ·密码子偏爱性分析 | 第22-23页 |
| 3. 结果与分析 | 第23-35页 |
| ·海豚链球菌cpsD基因的PCR扩增和T-克隆鉴定 | 第23-24页 |
| ·核苷酸序列分子特性分析 | 第24页 |
| ·蛋白质序列的分子特性分析 | 第24-32页 |
| ·密码子偏爱性分析 | 第32-35页 |
| 4. 讨论 | 第35-38页 |
| ·cpsD基因的引物设计和克隆 | 第35-36页 |
| ·cpsD基因的分子特性 | 第36-37页 |
| ·密码子偏爱性对蛋白表达的影响 | 第37-38页 |
| 第二节 海豚链球菌cpsD基因的原核表达及多克隆抗体制备 | 第38-55页 |
| 1. 试验材料 | 第38-41页 |
| ·菌株及载体 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要溶液及培养基的配置 | 第38-41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| 2. 试验方法 | 第41-46页 |
| ·cpsD基因重组质粒表达菌株的构建 | 第41-43页 |
| ·重组表达质粒转化入BL21(DE3)/pLysS表达宿主菌及鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第45页 |
| ·兔抗CpsD多克隆抗体的制备 | 第45-46页 |
| 3. 结果与分析 | 第46-51页 |
| ·重组表达质粒pET-32a(+)-cpsD鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第47-50页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第50页 |
| ·免疫兔血清的Western-blot检测 | 第50-51页 |
| ·琼脂扩散试验效价的检测 | 第51页 |
| 4. 讨论 | 第51-55页 |
| ·外源基因的表达 | 第51-52页 |
| ·诱导条件的优化 | 第52-53页 |
| ·包涵体的形成 | 第53-54页 |
| ·兔抗CpsD重组蛋白血清的制备 | 第54-55页 |
| 第三节 间接原位PCR检测海豚链球菌感染斑点叉尾鮰组织分布 | 第55-72页 |
| 1. 试验材料 | 第55-56页 |
| ·试验菌株 | 第55页 |
| ·试验动物 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·主要溶液及培养基配制 | 第55-56页 |
| 2. 试验方法 | 第56-61页 |
| ·饲养管理 | 第56页 |
| ·菌株培养 | 第56-57页 |
| ·斑点叉尾鮰的人工感染S. iniae-DGX07菌株试验 | 第57页 |
| ·引物及特异性探针的设计和合成 | 第57页 |
| ·寡核苷酸的探针稀释 | 第57页 |
| ·间接原位PCR方法检测海豚链球菌在组织中的分布 | 第57-60页 |
| ·结果判定 | 第60页 |
| ·间接原位PCR反应条件优化 | 第60-61页 |
| ·间接原位PCR特异性试验 | 第61页 |
| 3. 结果与分析 | 第61-64页 |
| ·引物及探针的特异性 | 第61-62页 |
| ·间接原位PCR条件优化 | 第62页 |
| ·间接原位PCR特异性试验 | 第62-63页 |
| ·间接原位PCR检测海豚链球菌在斑点叉尾鮰体内的分布规律 | 第63-64页 |
| 4. 讨论 | 第64-68页 |
| ·间接原位PCR的应用 | 第64页 |
| ·间接原位PCR的影响因素 | 第64-66页 |
| ·海豚链球菌在斑点叉尾鮰体内的分布规律 | 第66-68页 |
| 图版Ⅰ间接原位PCR检测海豚链球菌 | 第68-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
