| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-30页 |
| 1 基因芯片技术及其在病原微生物研究中的应用 | 第10-16页 |
| ·基因芯片的概念 | 第10页 |
| ·基因芯片的分类 | 第10页 |
| ·基因芯片的技术流程 | 第10-12页 |
| ·基因芯片载体的选择 | 第11页 |
| ·基因芯片的制备方法 | 第11页 |
| ·基因芯片待检样品的制备方法及标记 | 第11-12页 |
| ·基因芯片的杂交 | 第12页 |
| ·基因芯片杂交信号的检测和分析 | 第12页 |
| ·基因芯片技术在病原微生物研究中的应用 | 第12-15页 |
| ·存在的问题与发展前景 | 第15-16页 |
| 2 猪瘟病毒分子生物学及诊断方法研究进展 | 第16-23页 |
| ·猪瘟病毒分子生物学研究进展 | 第16-19页 |
| ·猪瘟病毒的病原特性 | 第16-17页 |
| ·猪瘟病毒基因组结构与功能 | 第17-19页 |
| ·猪瘟病毒诊断方法研究进展 | 第19-23页 |
| ·实验室诊断 | 第19-23页 |
| 3 猪圆环病毒分子生物学及诊断方法研究进展 | 第23-30页 |
| ·猪圆环病毒分子生物学研究进展 | 第23-25页 |
| ·病毒的基因组特征 | 第23-24页 |
| ·病毒的结构蛋白特征 | 第24-25页 |
| ·猪圆环病毒诊断方法研究进展 | 第25-30页 |
| ·病毒分离 | 第25-26页 |
| ·免疫学诊断方法 | 第26-27页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第27-29页 |
| ·核酸杂交(ISH) | 第29页 |
| ·DNA 芯片 | 第29-30页 |
| 第二章 试验研究 | 第30-61页 |
| 试验一 CSFV-PCV2 检测基因芯片目的基因的克隆与鉴定 | 第30-48页 |
| 引言 | 第30-31页 |
| 1 材料与方法 | 第31-39页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·病毒 | 第31页 |
| ·细胞和载体 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·试验仪器 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-39页 |
| ·病毒核酸的提取 | 第32-34页 |
| ·病毒核酸浓度的测定 | 第34页 |
| ·引物的设计和标记 | 第34页 |
| ·目的基因的 RT-PCR 及 PCR 扩增 | 第34-35页 |
| ·目的基因的凝胶回收 | 第35-36页 |
| ·目的基因的连接重组 | 第36-37页 |
| ·目的基因的转化 | 第37页 |
| ·目的基因重组质粒的鉴定 | 第37-39页 |
| ·目的基因的序列测定 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-45页 |
| ·病毒核酸的提取及浓度的测定 | 第39页 |
| ·目的基因引物设计结果 | 第39页 |
| ·目的基因 PCR 扩增结果 | 第39-40页 |
| ·目的基因的凝胶回收 | 第40-41页 |
| ·目的基因克隆结果 | 第41页 |
| ·目的基因重组质粒 PCR 鉴定 | 第41页 |
| ·目的基因序列测定结果 | 第41-45页 |
| ·CSFV 核苷酸序列比较结果 | 第41-43页 |
| ·PCV2 核苷酸序列比较结果 | 第43-45页 |
| 3 结论与讨论 | 第45-48页 |
| ·结论 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·目的基因的选择 | 第46页 |
| ·目的基因引物设计 | 第46页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增、克隆和鉴定 | 第46页 |
| ·目的基因的多重序列对位排列分析和 BLASTN 分析 | 第46-48页 |
| 试验二 CSFV-PCV2 检测基因芯片的构建 | 第48-55页 |
| 引言 | 第48页 |
| 1 材料与方法 | 第48-52页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·目的基因重组质粒 | 第48页 |
| ·主要的试剂和材料 | 第48-49页 |
| ·试验仪器 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-52页 |
| ·PCR 引物的标记和探针的合成及修饰 | 第49-50页 |
| ·基因芯片目的基因的制备及纯化 | 第50页 |
| ·探针的稀释、固定与基因芯片的制备 | 第50-51页 |
| ·基因芯片的杂交检测步骤 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-53页 |
| ·目的基因的制备及纯化 | 第52页 |
| ·基因芯片杂交结果的分析 | 第52-53页 |
| 3 结论与讨论 | 第53-55页 |
| ·结论 | 第53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| ·基因芯片的制作 | 第53-54页 |
| ·目的基因的标记和探针的修饰 | 第54页 |
| ·基因芯片杂交结果判定 | 第54-55页 |
| 试验三 CSFV-PCV2 检测基因芯片的检测技术研究 | 第55-61页 |
| 引言 | 第55页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| ·CSFV-PCV2 检测基因芯片 | 第55页 |
| ·CSFV-PCV2 检测基因芯片的特异性试验 | 第55-56页 |
| ·CSFV-PCV2 检测基因芯片的敏感性试验 | 第56页 |
| ·应用基因芯片对采集的临床样品进行检测 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-59页 |
| ·CSFV-PCV2 检测基因芯片的特异性试验结果 | 第57页 |
| ·CSFV-PCV2 检测基因芯片的敏感性试验结果 | 第57-58页 |
| ·CSFV-PCV2 检测基因芯片对临床样品的检测结果 | 第58-59页 |
| 3 结论与讨论 | 第59-61页 |
| ·结论 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| ·基因芯片检测技术特点 | 第59-60页 |
| ·CSFV-PCV2 检测基因芯片检测技术的敏感性、特异性研究 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 英文摘要 | 第71-73页 |
| 附录 | 第73-77页 |
| 附录一:主要培养基和溶液的配制 | 第73-75页 |
| 附录二:彩图 | 第75-76页 |
| 附录三:测序图 | 第76-77页 |