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猪瘟病毒和猪2型圆环病毒基因芯片检测技术研究

致谢第1-9页
摘要第9-10页
第一章 文献综述第10-30页
 1 基因芯片技术及其在病原微生物研究中的应用第10-16页
   ·基因芯片的概念第10页
   ·基因芯片的分类第10页
   ·基因芯片的技术流程第10-12页
     ·基因芯片载体的选择第11页
     ·基因芯片的制备方法第11页
     ·基因芯片待检样品的制备方法及标记第11-12页
     ·基因芯片的杂交第12页
     ·基因芯片杂交信号的检测和分析第12页
   ·基因芯片技术在病原微生物研究中的应用第12-15页
   ·存在的问题与发展前景第15-16页
 2 猪瘟病毒分子生物学及诊断方法研究进展第16-23页
   ·猪瘟病毒分子生物学研究进展第16-19页
     ·猪瘟病毒的病原特性第16-17页
     ·猪瘟病毒基因组结构与功能第17-19页
   ·猪瘟病毒诊断方法研究进展第19-23页
     ·实验室诊断第19-23页
 3 猪圆环病毒分子生物学及诊断方法研究进展第23-30页
   ·猪圆环病毒分子生物学研究进展第23-25页
     ·病毒的基因组特征第23-24页
     ·病毒的结构蛋白特征第24-25页
   ·猪圆环病毒诊断方法研究进展第25-30页
     ·病毒分离第25-26页
     ·免疫学诊断方法第26-27页
     ·分子生物学诊断方法第27-29页
     ·核酸杂交(ISH)第29页
     ·DNA 芯片第29-30页
第二章 试验研究第30-61页
 试验一 CSFV-PCV2 检测基因芯片目的基因的克隆与鉴定第30-48页
  引言第30-31页
  1 材料与方法第31-39页
   ·材料第31-32页
     ·病毒第31页
     ·细胞和载体第31页
     ·主要试剂第31-32页
     ·试验仪器第32页
   ·方法第32-39页
     ·病毒核酸的提取第32-34页
     ·病毒核酸浓度的测定第34页
     ·引物的设计和标记第34页
     ·目的基因的 RT-PCR 及 PCR 扩增第34-35页
     ·目的基因的凝胶回收第35-36页
     ·目的基因的连接重组第36-37页
     ·目的基因的转化第37页
     ·目的基因重组质粒的鉴定第37-39页
     ·目的基因的序列测定第39页
  2 结果与分析第39-45页
   ·病毒核酸的提取及浓度的测定第39页
   ·目的基因引物设计结果第39页
   ·目的基因 PCR 扩增结果第39-40页
   ·目的基因的凝胶回收第40-41页
   ·目的基因克隆结果第41页
   ·目的基因重组质粒 PCR 鉴定第41页
   ·目的基因序列测定结果第41-45页
     ·CSFV 核苷酸序列比较结果第41-43页
     ·PCV2 核苷酸序列比较结果第43-45页
  3 结论与讨论第45-48页
   ·结论第45-46页
   ·讨论第46-48页
     ·目的基因的选择第46页
     ·目的基因引物设计第46页
     ·目的基因的 PCR 扩增、克隆和鉴定第46页
     ·目的基因的多重序列对位排列分析和 BLASTN 分析第46-48页
 试验二 CSFV-PCV2 检测基因芯片的构建第48-55页
  引言第48页
  1 材料与方法第48-52页
   ·材料第48-49页
     ·目的基因重组质粒第48页
     ·主要的试剂和材料第48-49页
     ·试验仪器第49页
   ·方法第49-52页
     ·PCR 引物的标记和探针的合成及修饰第49-50页
     ·基因芯片目的基因的制备及纯化第50页
     ·探针的稀释、固定与基因芯片的制备第50-51页
     ·基因芯片的杂交检测步骤第51-52页
  2 结果与分析第52-53页
   ·目的基因的制备及纯化第52页
   ·基因芯片杂交结果的分析第52-53页
  3 结论与讨论第53-55页
   ·结论第53页
   ·讨论第53-55页
     ·基因芯片的制作第53-54页
     ·目的基因的标记和探针的修饰第54页
     ·基因芯片杂交结果判定第54-55页
 试验三 CSFV-PCV2 检测基因芯片的检测技术研究第55-61页
  引言第55页
  1 材料与方法第55-57页
   ·材料第55页
   ·方法第55-57页
     ·CSFV-PCV2 检测基因芯片第55页
     ·CSFV-PCV2 检测基因芯片的特异性试验第55-56页
     ·CSFV-PCV2 检测基因芯片的敏感性试验第56页
     ·应用基因芯片对采集的临床样品进行检测第56-57页
  2 结果与分析第57-59页
   ·CSFV-PCV2 检测基因芯片的特异性试验结果第57页
   ·CSFV-PCV2 检测基因芯片的敏感性试验结果第57-58页
   ·CSFV-PCV2 检测基因芯片对临床样品的检测结果第58-59页
  3 结论与讨论第59-61页
   ·结论第59页
   ·讨论第59-61页
     ·基因芯片检测技术特点第59-60页
     ·CSFV-PCV2 检测基因芯片检测技术的敏感性、特异性研究第60-61页
参考文献第61-71页
英文摘要第71-73页
附录第73-77页
 附录一:主要培养基和溶液的配制第73-75页
 附录二:彩图第75-76页
 附录三:测序图第76-77页

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