| 英文缩略词 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| 第一部分 基于MS2 VLPs的前列腺癌预防及治疗性mRNA疫苗的研究 | 第18-83页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 1. 材料与方法 | 第20-47页 |
| ·材料 | 第20-30页 |
| ·菌株、细胞系和质粒 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21-23页 |
| ·溶液的配制 | 第23-29页 |
| ·仪器及耗材 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-47页 |
| ·pMS2-hPAP-GM-CSF、pMS2-mPAP-GM-CSF等酵母表达载体的构建 | 第30-36页 |
| ·hPAP-GM-CSF VLPs、mPAP-GM-CSF VLPs等的表达及纯化 | 第36-39页 |
| ·hPAP-GM-CSF VLPs、mPAP-GM-CSF VLPs等的鉴定 | 第39-42页 |
| ·CCK法检测细胞毒性 | 第42页 |
| ·hPAP-GM-CSF VLPs免疫刺激活性的检测 | 第42页 |
| ·VLPs包裹的mRNA体外翻译能力及清除速率的分析 | 第42-43页 |
| ·mRNA疫苗接种 | 第43页 |
| ·ELISA法检测抗体效价 | 第43页 |
| ·T细胞增殖实验 | 第43-44页 |
| ·ELISA法和ELISPOT法检测细胞因子 | 第44-45页 |
| ·FACS法检测树突状细胞(DCs)和调节性T细胞(Tregs) | 第45-46页 |
| ·肿瘤接种及肿瘤大小检测 | 第46页 |
| ·统计学分析 | 第46-47页 |
| 2. 结果 | 第47-72页 |
| ·pMS2-hPAP-GM-CSF、pMS2-mPAP-GM-CSF等酵母表达载体的构建 | 第47-49页 |
| ·hPAP-GM-CSF VLPs、mPAP-GM-CSF VLPs等的表达及纯化 | 第49页 |
| ·hPAP-GM-CSF VLPs、mPAP-GM-CSF VLPs等的鉴定 | 第49-54页 |
| ·VLPs包裹的mRNA体外翻译能力及清除速率的分析 | 第54-56页 |
| ·hPAP-GM-CSF VLPs的细胞毒性及免疫刺激能力的分析 | 第56-57页 |
| ·hPAP-GM-CSF VLPs等mRNA疫苗对DCs的激活作用 | 第57-60页 |
| ·hPAP-GM-CSF VLPs等mRNA疫苗诱导的体液免疫应答 | 第60-62页 |
| ·hPAP-GM-CSF VLPs等mRNA疫苗诱导的细胞免疫应答 | 第62-66页 |
| ·hPAP-GM-CSF VLPs等mRNA疫苗对调节性T细胞的影响 | 第66-68页 |
| ·hPAP-GM-CSF VLPs等mRNA疫苗肿瘤预防效果的评估 | 第68-71页 |
| ·hPAP-GM-CSF VLPs等mRNA疫苗肿瘤治疗效果的评估 | 第71-72页 |
| 3. 讨论 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 第二部分 基于MS2 VLPs的前列腺癌治疗性microRNA疫苗的初步研究 | 第83-124页 |
| 前言 | 第83-85页 |
| 1. 材料与方法 | 第85-102页 |
| ·材料 | 第85-94页 |
| ·菌株、细胞系和质粒 | 第85页 |
| ·主要试剂 | 第85-87页 |
| ·溶液的配制 | 第87-92页 |
| ·仪器及耗材 | 第92-94页 |
| ·方法 | 第94-102页 |
| ·p2MS2-microRNA-23a、p2MS2-microRNA-23b等酵母表达载体的构建 | 第94-97页 |
| ·TAT-microRNA-23a VLPs、TAT-microRNA-23b VLPs等的表达及纯化 | 第97-99页 |
| ·TAT-microRNA-23a VLPs、TAT-microRNA-23b VLPs的鉴定 | 第99-100页 |
| ·CCK法检测细胞毒性 | 第100页 |
| ·TAT-mRNA VLPs及TAT-microRNA VLPs体外翻译能力的分析 | 第100-102页 |
| ·FACS法检测肿瘤细胞凋亡 | 第102页 |
| ·统计学分析 | 第102页 |
| 2. 结果 | 第102-119页 |
| ·p2MS2-microRNA-23a、p2MS2-microRNA-23b等酵母表达载体的构建 | 第102-105页 |
| ·TAT-microRNA-23a VLPs、TAT-microRNA-23b VLPs等的表达及纯化 | 第105-107页 |
| ·TAT-microRNA-23a VLPs、TAT-microRNA-23b VLPs等的鉴定 | 第107-113页 |
| ·TAT-microRNA-23a VLPs的细胞毒性分析 | 第113页 |
| ·携带TAT的VLPs包裹的RNA体外翻译能力的分析 | 第113-117页 |
| ·TAT-microRNA-23a VLPs体外抗肿瘤效果的评价 | 第117-119页 |
| 3. 讨论 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-124页 |
| 论文综述 | 第124-141页 |
| 参考文献 | 第132-141页 |
| 附录1 pESC-URA载体信息 | 第141-142页 |
| 附录2 pGEM~(?)-T Easy载体信息 | 第142-143页 |
| 附录3 重组表达载体pMS2测序和序列比对结果 | 第143-145页 |
| 附录4 重组表达载体pMS2p测序和序列比对结果 | 第145-147页 |
| 附录5 重组表达载体pMS2-hPAP测序和序列比对结果 | 第147-150页 |
| 附录6 重组表达载体pMS2-mPAP测序和序列比对结果 | 第150-153页 |
| 附录7 重组表达载体pMS2-GM-CSF测序和序列比对结果 | 第153-155页 |
| 附录8 重组表达载体pMS2-hPAP-GM-CSF测序和序列比对结果 | 第155-159页 |
| 附录9 重组表达载体pMS2-mPAP-GM-CSF测序和序列比对结果 | 第159-163页 |
| 附录10 重组表达载体p2MS2测序和序列比对结果 | 第163-165页 |
| 附录11 重组表达载体p2MS2-GM-CSF测序和序列比对结果 | 第165-167页 |
| 附录12 重组表达载体p2MS2-GFP测序和序列比对结果 | 第167-169页 |
| 附录13 重组表达载体p2MS2-microRNA-23a测序和序列比对结果 | 第169-171页 |
| 附录14 重组表达载体p2MS2-microRNA-23b测序和序列比对结果 | 第171-173页 |
| 附录15 重组表达载体p2MS2-microRNA-con测序和序列比对结果 | 第173-175页 |
| 致谢 | 第175-176页 |
| 个人简介 | 第176页 |
