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家蚕内层卵壳蛋白及蚕卵致死突变体(l-e~m)突变机理研究

摘要第1-14页
ABSTRACT第14-20页
第一章 文献综述第20-32页
   ·概述第20页
   ·昆虫卵子发生过程(Oogenesis)第20-23页
     ·昆虫卵子发生的基本功能单元第20页
     ·昆虫卵子发生的时期划分及特征第20-23页
   ·昆虫卵壳结构特点及功能第23-27页
     ·昆虫卵壳结构的多样性及功能第23-24页
     ·昆虫卵壳外表面的结构特点第24-25页
     ·昆虫卵壳结构的分层、超微特点及功能第25-27页
     ·昆虫胞外卵壳结构的组装过程第27页
   ·昆虫卵壳蛋白及其编码基因研究进展第27-30页
     ·昆虫卵壳蛋白第27页
     ·昆虫外层卵壳结构蛋白(Chorion proteins)及其编码基因(以家蚕为例)第27-28页
     ·昆虫卵黄膜层结构蛋白(VMPs)及其编码基因(以果蝇为例)第28-30页
     ·鳞翅目昆虫卵黄膜蛋白及其编码基因第30页
   ·家蚕蛋白质组学的研究进展第30-31页
   ·结语第31-32页
第二章 引言第32-36页
   ·研究目的及意义第32页
   ·科学问题和主要研究内容第32-34页
   ·实验技术路线第34-36页
第三章 家蚕蚕卵和卵巢组织蛋白质组学分析第36-62页
   ·材料和方法第37-42页
     ·家蚕饲养及组织分离第37页
     ·家蚕本地蛋白质数据库的构建第37-38页
     ·双向电泳蛋白质样品的制备第38页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质染色第38页
     ·双向电泳实验及胶图扫描、软件分析第38-39页
     ·家蚕卵巢、蚕卵蛋白质的MALDI-TOF-MS质谱鉴定第39页
     ·主要仪器设备第39-40页
     ·主要试剂及溶液配方第40-42页
   ·结果与分析第42-59页
     ·家蚕蛹期卵巢、胚胎期蚕卵蛋白质双向电泳结果第42页
     ·家蚕蛹期卵巢、蚕卵蛋白质图谱的构建第42-52页
     ·家蚕蚕卵受精前后比较蛋白质组学分析结果第52-55页
     ·家蚕滞育性及非滞育性蚕卵卵蛋白的双向电泳图谱第55-56页
     ·家蚕小卵突变种蛹期卵巢蛋白质的双向电泳图谱第56-59页
   ·结论与讨论第59-62页
第四章 家蚕BmEP80表达特征及功能研究第62-84页
   ·材料和方法第62-74页
     ·家蚕饲养及组织分离第62页
     ·家蚕蛹期卵巢及其它组织RNA提取、cDNA制备、RT-PCR检测第62-64页
     ·BmEP80原位杂交实验第64-66页
     ·家蚕蚕卵不同组分蛋白质分离、样品制备、SDS-PAGE及双向电泳第66页
     ·BmEP80原核表达及His-BmEP80融合蛋白纯化第66-68页
     ·BmEP80抗体的制备及点杂交检测第68-69页
     ·Western blot分析第69-70页
     ·BmEP80免疫组化分析第70页
     ·BmEP80 RNAi实验第70-71页
     ·主要仪器设备第71页
     ·主要试剂及溶液配方第71-74页
   ·结果与分析第74-82页
     ·BmEP80表达特征第74页
     ·BmEP80 mRNA在滤泡结构中的定位分析结果第74-76页
     ·BmEP80在蚕卵中的分布情况第76页
     ·BmEP80在蚕卵受精前后的变化情况第76-77页
     ·His-BmEP80原核表达、蛋白纯化、多克隆抗体制备及点杂交结果第77-79页
     ·BmEP80在不同发育时期滤泡中的表达特征第79-80页
     ·BmEP80在卵壳结构层中的定位结果第80页
     ·BmEP80 RNA干涉结果及蚕卵表型第80-82页
   ·结论与讨论第82-84页
第五章 鳞翅目昆虫卵黄膜蛋白编码基因预测、表达特征及功能域分析第84-94页
   ·材料和方法第84-86页
     ·家蚕饲养、组织分离、RNA抽提、cDNA制备及RT-PCR检测第84页
     ·鳞翅目昆虫基因组序列获取及卵黄膜蛋白编码基因预测第84-85页
     ·家蚕基因组DNA抽提及家蚕预测卵黄膜蛋白编码基因克隆验证第85-86页
     ·主要仪器设备第86页
     ·主要试剂及溶液配方第86页
   ·结果与分析第86-92页
     ·鳞翅目昆虫卵黄膜蛋白编码区及编码基因第86-88页
     ·家蚕预测卵黄膜蛋白编码基因的时空表达特征第88-89页
     ·鳞翅目昆虫卵黄膜蛋白分类及VM结构域第89-92页
     ·鳞翅目昆虫卵黄膜蛋白氨基酸组成第92页
   ·结论与讨论第92-94页
第六章 家蚕蚕卵致死突变体(ι-e~m)突变机理研究第94-128页
   ·材料和方法第94-99页
     ·家蚕饲养、组织分离、RNA抽提及cDNA制备第94页
     ·卵壳蛋白质样品的制备及双向电泳分析第94-95页
     ·家蚕基因组DNA抽提及个体基因型鉴定第95页
     ·基因组PCR(Genomic PCR)第95页
     ·反向PCR(Inverse PCR)第95-96页
     ·基因组qPCR和qRT-PCR分析第96页
     ·基因组Southern blot分析第96-98页
     ·主要仪器设备第98页
     ·主要试剂及溶液配方第98-99页
   ·结果与分析第99-125页
     ·“明”死卵突变体蚕卵表型第99页
     ·ι-e~m/ι-e~m、+/ι-e~m雌蛾未受精卵卵壳蛋白双向电泳结果第99-100页
     ·ι-e~m/ι-e~m、+/ι-e~m雌蛾未受精卵卵壳蛋白Western blot结果第100页
     ·BmEP80 mRNA在ι-e~m/ι-e~m、+/ι-e~m个体卵巢组织中表达特征第100-101页
     ·ι-e~m突变体基因组中BmEP80位点结构特征解析第101-109页
     ·ι-e~m突变体基因组结构验证第109-112页
     ·“明”死卵突变体个体基因型鉴定第112-113页
     ·染色体片段重复事件中涉及基因的表达特征第113-114页
     ·LTR型反转录转座子Qian及Qian-like结构特点第114-117页
     ·Qian介导染色体片段重复的模型第117-125页
   ·结论与讨论第125-128页
第七章 综合与结论第128-132页
论文创新点第132-134页
参考文献第134-140页
附录第140-146页
在读期间发表论文及参研课题第146-148页
致谢第148页

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