| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 符号说明 | 第12-18页 |
| 图序 | 第18-20页 |
| 表序 | 第20-21页 |
| 第一章 绪论靶向肝脏的基因治疗 | 第21-41页 |
| ·肝脏基因治疗概述 | 第21-30页 |
| ·肝脏基因治疗的概念 | 第21-23页 |
| ·肝脏基因治疗的策略 | 第23-25页 |
| ·肝脏基因治疗的疾病应用 | 第25-27页 |
| ·肝脏基因治疗需要考虑的关键问题 | 第27-28页 |
| ·肝脏基因治疗的前景与展望 | 第28-30页 |
| ·肝脏的靶向基因治疗技术 | 第30-41页 |
| ·肝脏基因治疗的载体系统 | 第30-35页 |
| ·靶向肝细胞定位表达的基因治疗载体 | 第35-36页 |
| ·RNA干扰技术在肝脏靶向基因治疗中的应用 | 第36页 |
| ·多功能基因治疗载体的发展和改进 | 第36-37页 |
| ·肝脏基因治疗的候选基因靶点 | 第37-41页 |
| 第二章 材料与方法 | 第41-71页 |
| ·实验材料 | 第41-48页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·细胞及培养试剂材料 | 第41页 |
| ·质粒 | 第41-42页 |
| ·质粒制备抽提试剂盒 | 第42页 |
| ·载体构建相关材料及试剂 | 第42-43页 |
| ·病毒载体构建及病毒制备试剂 | 第43页 |
| ·真核转染试剂 | 第43页 |
| ·荧光素酶报告基因检测试剂 | 第43页 |
| ·小鼠肝实质细胞分离相关试剂和材料 | 第43-44页 |
| ·小鼠单个核细胞分离相关试剂和材料 | 第44页 |
| ·流式细胞术检测抗体 | 第44-45页 |
| ·血清谷丙转氨酶(ALT)检测试剂 | 第45页 |
| ·肝组织病理切片及苏木素-伊红染色试剂 | 第45页 |
| ·细胞因子ELISA检测试剂盒 | 第45页 |
| ·X-Gal染色检测bacterial galactosidase(LacZ)活性 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR 及 real-time qPCR 试齐ij | 第46页 |
| ·其他试剂及材料 | 第46-48页 |
| ·实验仪器及设备 | 第48-49页 |
| ·小鼠手术器械 | 第48页 |
| ·小鼠肝实质细胞、淋巴细胞分离器械 | 第48页 |
| ·细胞培养仪器设备 | 第48-49页 |
| ·流式细胞仪 | 第49页 |
| ·病理切片仪器设备 | 第49页 |
| ·分子克隆仪器设备 | 第49页 |
| ·其他仪器设备 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-71页 |
| ·载体构建及分子克隆 | 第49-60页 |
| ·真核细胞的转染 | 第60-61页 |
| ·真核贴壁细胞的复苏、培养与冻存 | 第61页 |
| ·细胞计数 | 第61-62页 |
| ·复制缺陷型腺病毒载体质粒构建、包装及扩增纯化重组腺病毒 | 第62-64页 |
| ·高压尾静脉注射 | 第64页 |
| ·冰冻切片技术 | 第64页 |
| ·荧光素酶报告基因检测 | 第64-65页 |
| ·X-Gal染色检测bacterial galactosidase(LacZ)活性 | 第65页 |
| ·小动物成像系统观察腺病毒体内感染 | 第65页 |
| ·血清转氨酶ALT测定(赖氏法) | 第65-66页 |
| ·ELISA测定细胞因子 | 第66页 |
| 2 3.13 肝组织病理切片及H-E染色 | 第66-67页 |
| ·小鼠肝实质细胞分离 | 第67-68页 |
| ·小鼠单个核细胞分离 | 第68页 |
| ·FACS检测细胞表面标志 | 第68-69页 |
| ·小鼠急性肝损伤模型(腺病毒感染、PolyⅠ：C/D-GalN注射) | 第69页 |
| ·统计学分析 | 第69-71页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第71-106页 |
| ·引言 | 第71-72页 |
| ·肝细胞特异性多功能载体的构建与验证 | 第72-82页 |
| ·肝细胞特异性启动子的选择 | 第72-74页 |
| ·肝细胞特异性启动子与CMV启动子的比较 | 第74-78页 |
| ·肝细胞特异性RNA干扰的实现 | 第78-81页 |
| ·肝细胞特异性多功能载体的构建与验证 | 第81-82页 |
| ·肝脏靶向性多功能载体有效抑制腺病毒引起的肝脏损伤 | 第82-99页 |
| ·高剂量腺病毒诱导的急性肝损伤 | 第82-83页 |
| ·联合干扰FKN和CCL5有效抑制高剂量腺病毒诱导的急性肝损伤 | 第83-87页 |
| ·联合干扰FKN和表达huIL-10有效抑制高剂量腺病毒诱导的急性肝损伤 | 第87-89页 |
| ·同时干扰FKN/CCL5、表达huIL-10高效抑制高剂量腺病毒诱导的急性肝损伤 | 第89-90页 |
| ·肝脏靶向性多功能载体在腺病毒诱导急性肝损伤模型中的功能验证 | 第90-92页 |
| ·肝脏靶向性多功能载体高效抑制高剂量腺病毒诱导的急性肝损伤 | 第92-95页 |
| ·肝脏靶向性多功能载体能维持长期的保护效果 | 第95页 |
| ·肝脏靶向性多功能载体能通过腺病毒进行功能传递 | 第95-99页 |
| ·肝脏靶向性多功能载体抑制Poly Ⅰ：C/D-GalN诱导的急性肝损伤 | 第99-102页 |
| ·肝脏靶向性多功能载体在poly Ⅰ：C/D-GalN诱导急性肝损伤模型中的功能验证 | 第99-100页 |
| ·肝脏靶向性多功能载体高效抑制Poly Ⅰ：C/D-GalN诱导的急性肝损伤 | 第100-102页 |
| ·讨论 | 第102-106页 |
| ·肝脏靶向性基因治疗载体的研究进展 | 第102-103页 |
| ·基于microRNA结构的第二代RNA干扰载体 | 第103-104页 |
| ·肝脏靶向性多功能载体在肝脏疾病中的优势 | 第104页 |
| ·肝脏基因治疗的前景与展望 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-123页 |
| 致谢 | 第123-125页 |
| 攻读博士学位期间的主要研究成果 | 第125-126页 |
| 发表和拟发表学术论文情况 | 第125页 |
| 发明专利 | 第125页 |
| 攻读博士学位期间参加参加学术会议 | 第125-126页 |
| 攻读博士学位期间所获得奖励 | 第126页 |
