| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-24页 |
| ·ETEC 不耐热肠毒素（LT）研究进展 | 第14-18页 |
| ·LTA 与 LTB 的蛋白质结构 | 第16页 |
| ·LTA 与 LTB 的功能特性 | 第16-17页 |
| ·LTA 与 LTB 作为黏膜免疫佐剂的研究 | 第17-18页 |
| ·黏膜免疫的研究进展 | 第18-21页 |
| ·黏膜免疫疫苗的研究 | 第19页 |
| ·黏膜免疫佐剂的研究 | 第19-21页 |
| ·乳酸菌作为黏膜传递载体的应用 | 第21-23页 |
| ·乳酸菌的益生性生理功能 | 第21-22页 |
| ·乳酸杆菌作为黏膜疫苗活载体的研究 | 第22-23页 |
| ·研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-40页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·质粒、菌种与细胞 | 第24页 |
| ·试验动物 | 第24页 |
| ·抗体制剂 | 第24页 |
| ·引物合成 | 第24-25页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·主要实验仪器与设备 | 第25-26页 |
| ·试验方法 | 第26-40页 |
| ·目的基因的获得 | 第26-32页 |
| ·LTB 单克隆抗体的制备 | 第32-33页 |
| ·LTA 基因在大肠杆菌中的诱导表达和免疫原性分析 | 第33-35页 |
| ·重组干酪乳杆菌表达系统构建 | 第35-37页 |
| ·重组干酪乳杆菌的诱导及表达蛋白鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组干酪乳杆菌灌胃免疫小鼠 FaeG 抗体的监测 | 第38-39页 |
| ·重组干酪乳杆菌灌胃免疫小鼠攻毒保护性试验 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-59页 |
| ·目的基因的克隆与序列测定 | 第40-43页 |
| ·PCR 扩增 LTA、LTB、rsLTB 基因结果 | 第40-41页 |
| ·重组质粒 pMD18-Ts-LTA、pMD18-Ts-LTB 和 pMD18-Ts-rsLTB 的鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·用 PCR 重叠延伸法突变 LTA 基因 | 第42页 |
| ·重组质粒 pMD18-Ts-LTAK63、pMD18-Ts-LTAK63t 的鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·LTB 单克隆抗体的制备 | 第43-46页 |
| ·抗原制备及其 GM1 结合活性检测 | 第43-44页 |
| ·杂交瘤细胞的检测与细胞株的建立 | 第44页 |
| ·单克隆抗体的特异性检测 | 第44-45页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体稳定性的分析 | 第45-46页 |
| ·杂交瘤细胞株染色体分析 | 第46页 |
| ·LTA 基因在大肠杆菌中的诱导表达和免疫原性分析 | 第46-49页 |
| ·原核表达载体 pET-28a-LTA 的构建 | 第46-47页 |
| ·LTA 基因在大肠杆菌中表达产物的 SDS-PAGE 鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白 LTA 表达鉴定及纯化 | 第48页 |
| ·间接 ELISA 检测重组 LTA 抗血清效价 | 第48页 |
| ·重组蛋白 LTA 抗原性的检测 | 第48-49页 |
| ·重组干酪乳杆菌表达系统的构建 | 第49-52页 |
| ·重组干酪乳杆菌表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·表达 LTAK63t-rsLTB、LTAK63-LTB 重组干酪乳杆菌的构建 | 第51-52页 |
| ·重组干酪乳杆菌的诱导及表达蛋白的鉴定 | 第52-53页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 鉴定 | 第52页 |
| ·表达产物的 Western Blot 鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组干酪乳杆菌对 FaeG 诱导特异性免疫应答的影响 | 第53-57页 |
| ·免疫小鼠血清中抗 FaeG 特异性抗体 IgG 测定 | 第53-54页 |
| ·免疫小鼠外生殖道冲洗液抗 FaeG 特异性 sIgA 检测结果 | 第54-55页 |
| ·免疫小鼠鼻腔冲洗液抗 FaeG 特异性 sIgA 检测结果 | 第55-56页 |
| ·免疫小鼠粪便中抗 FaeG 特异性 sIgA 检测结果 | 第56-57页 |
| ·免疫小鼠脾淋巴细胞增殖试验 | 第57页 |
| ·重组干酪乳杆菌灌胃免疫小鼠保护性试验 | 第57-59页 |
| ·K88+ETEC 对小鼠最小致死量的测定结果 | 第57-58页 |
| ·免疫小鼠的攻毒保护性试验结果 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-64页 |
| ·课题的研究思路 | 第59页 |
| ·LTB 单克隆抗体的制备 | 第59-60页 |
| ·LTAK63 与 LTB 基因在重组干酪乳杆菌中的表达 | 第60-61页 |
| ·添加重组干酪乳杆菌黏膜免疫佐剂对特异性免疫应答的影响 | 第61-63页 |
| ·添加重组干酪乳杆菌黏膜免疫佐剂对细胞免疫应答的影响 | 第61-62页 |
| ·添加重组干酪乳杆菌黏膜免疫佐剂对体液免疫应答的影响 | 第62页 |
| ·添加重组干酪乳杆菌黏膜免疫佐剂对小鼠感染 K88+ETEC 菌株的保护力影响 | 第62-63页 |
| ·LTAK63、LTB 蛋白的融合表达与共表达的佐剂活性差异分析 | 第63-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 附录 | 第74-76页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第76页 |
