| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| ·IgY的结构与功能 | 第12-14页 |
| ·IgY基因多样性形成的机制 | 第14-15页 |
| ·IgY应用的研究进展 | 第15-18页 |
| ·IgY在防治消化道疾病方面的应用研究 | 第15-17页 |
| ·IgY在防治非消化道疾病方面的应用研究 | 第17-18页 |
| ·IgY防治细菌或病毒性疾病的作用机理 | 第18-19页 |
| ·功能性小分子抗体片段的研究进展 | 第19-21页 |
| ·酶解法制备IgY活性片段的研究 | 第20页 |
| ·基因工程技术制备小分子抗体的研究 | 第20-21页 |
| ·本论文的研究意义和主要工作 | 第21-22页 |
| 2 特异性IgY及其酶解片段的制备与活性考察 | 第22-45页 |
| ·引言 | 第22-23页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·试验动物 | 第23页 |
| ·实验菌株 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·实验仪器 | 第24-25页 |
| ·溶液配制 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-32页 |
| ·菌种的活化与保存 | 第26页 |
| ·灭活疫苗的制备 | 第26页 |
| ·蛋鸡的免疫 | 第26-27页 |
| ·鸡蛋的收集及水溶性组分的提取 | 第27页 |
| ·血清的制备和抗原最佳包被浓度的确定 | 第27-28页 |
| ·特异性IgY效价水平的检测 | 第28页 |
| ·IgY的分离与纯化 | 第28-29页 |
| ·分离纯化各阶段IgY的纯度检测 | 第29-30页 |
| ·IgY对病原菌的生长抑制作用 | 第30页 |
| ·IgY与病原菌的特异性结合活性 | 第30-31页 |
| ·IgY对胰蛋白酶的稳定性 | 第31页 |
| ·酶解法制备IgY活性片段 | 第31-32页 |
| ·IgY酶解片段对病原菌的生长抑制 | 第32页 |
| ·Western检测IgY活性片段 | 第32页 |
| ·统计学分析 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-43页 |
| ·抗原最佳包被浓度的确定 | 第32-33页 |
| ·特异性IgY抗体效价水平的检测 | 第33-34页 |
| ·分离纯化IgY各阶段的SDS-PAGE | 第34-35页 |
| ·特异性IgY对病原菌的生长抑制作用 | 第35-36页 |
| ·特异性IgY与病原菌特异性结合活性的考察 | 第36-37页 |
| ·IgY对胰蛋白酶的稳定性考察 | 第37-39页 |
| ·胃蛋白酶酶解法制备IgY活性片段 | 第39-41页 |
| ·特异性IgY活性片段对病原菌的生长抑制作用 | 第41-42页 |
| ·Western blot确定IgY酶解组分中的活性片段 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-45页 |
| 3 特异性IgY活性可变区基因的钓取与原核表达 | 第45-71页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45-47页 |
| ·实验动物 | 第45-46页 |
| ·菌株、克隆载体 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·仪器 | 第46页 |
| ·溶液的配制 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-56页 |
| ·金黄色葡萄球菌灭活疫苗的制备 | 第47页 |
| ·蛋鸡的免疫及血液的采集及其效价的检测 | 第47页 |
| ·IgY可变区V_H和V_L基因文库的构建 | 第47-51页 |
| ·V_H和V_L序列的测定与引物的设计 | 第51页 |
| ·IgY可变区目的基因的原核表达 | 第51-56页 |
| ·表达产物的可溶性鉴定 | 第56页 |
| ·表达产物的活性鉴定-间接ELISA | 第56页 |
| ·数据分析 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-70页 |
| ·免疫血清的效价 | 第56-57页 |
| ·总RNA的纯度的检测 | 第57页 |
| ·IgY重轻链可变区的扩增与纯化 | 第57-58页 |
| ·重组质粒的连接、转化与PCR鉴定 | 第58-62页 |
| ·目的基因的酶切鉴定 | 第62-63页 |
| ·重组质粒pET28a-目的基因的连接、转化与鉴定 | 第63-65页 |
| ·重组质粒的提取、转化与鉴定 | 第65-67页 |
| ·IgY重、轻链可变区的诱导表达 | 第67-68页 |
| ·重组蛋白可溶性表达的鉴定 | 第68-69页 |
| ·重组蛋白的抗体活性检测 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |